Exogenous expression of protein phosphatase DUSP9 reduces the rate of migration of kidney carcinoma cells

Abstract

Поиск новых мишеней для терапевтического воздействия на метастатическую форму карциномы почки (КП) остается актуальной задачей на сегодняшний день. Одной из таких мишеней может быть протеинфосфатаза DUSP9. О значительном снижении уровня мРНК DUSP9 в клинических образцах КП по сравнению c нормальной тканью впервые сообщили Чебуркин с соавторами в 2002 году [1]. Позднее мы показали, что подавление экспрессии мРНК DUSP9 происходит уже на ранних стадиях заболевания. Мы также показали, что экспрессия гена DUSP9 при КП может регулироваться на эпигенетическом уровне и, кроме того, дифференциально, в зависимости от пола пациента. В последующие годы, онкосупрессорные свойства DUSP9 при КП были подтверждены другими исследователями. Целью данной работы было изучение влияния экзогенной экспрессии гена DUSP9 на пролиферацию и миграцию клеток КП человека. Материалы и методы. В работе использовалась DUSP9-негативная линия КП человека ACHN. Трансфекцию клеток проводили сконструированным нами DUSP9-экспрессирующим вектором. Эффективность трансфекции оценивали методами иммунофлуоресценции и вестерн-блота, количество жизнеспособных клеток MTT-тестом, скорость миграции клеток скрэтч-тестом. Внеклеточные везикулы из кондиционной среды выделяли, используя SubXTM технологию, и характеризовали методом анализа траекторий наночастиц и вестерн-блотом. Результаты. Эффективность трансфекции варьировала от 70% до 90%. Количество жизнеспособных клеток, экспрессирующих DUSP9, и клеток, трансфицированных вектором без вставки, различалась незначительно 48 часов после трансфекции. Экспрессия DUSP9 статистически значимо уменьшала скорость миграции клеток по сравнению с контролем. Белок DUSP9 обнаруживался в экзосомной фракции бессывороточной кондиционной среды от клеток, трансфицированных DUSP9-экспрессирующим вектором. Выводы. Мы показали, что экзогенная экспрессия DUSP9 замедляет миграцию клеток КП. Результат указывает на то, что одной из возможных ролей DUSP9 в канцерогенезе почки может быть регулирование процесса метастазирования.