RESUMO | OBJETIVO: Validar o conteúdo de um instrumento destinado à avaliação do conhecimento de enfermeiras(os) sobre Ventilação Mecânica. MÉTODO: Estudo metodológico, quantitativo, de validação, realizado com obtenção de questionário, adaptação e validação de conteúdo por juízes. A validação do questionário foi feita através do Índice de Validade de Conteúdo (IVC) por meio de juízes intensivistas (áreas de enfermagem, medicina e fisioterapia). As questões abordaram os modos e ajustes ventilatórios, ajustes de alarmes e ventilação protetora. O IVC avaliou a proporção de juízes em concordância (mínima de 80%) sobre determinada questão presente no instrumento. RESULTADOS: Na primeira rodada, 9 itens receberam IVC=100%. Apenas a questão 9 recebeu nota baixa por um dos juízes, atingindo IVC=80% e, por conta disso, foi reformulada. Após a reformulação deste quesito e a criação de outros dois de acordo com sugestões dos juízes, a versão final do questionário foi submetida a uma nova rodada de avaliação e contemplou IVC de 100%. CONCLUSÃO: O presente instrumento apresentou equivalência linguística e fortes evidências de validade de conteúdo no contexto brasileiro, podendo determinar uma adequada avaliação das práticas voltadas à VM. A verificação do conhecimento relacionado à VM relaciona-se ao fortalecimento da prática de enfermeiras(os) nos campos de atuação.