Evaluation of the polarographic technique for assay of the viability of freeze-dried BCG vaccine: II. Viability of the vaccine assessed by polarography, Warburg respirometry and colony counting

Malucelli, Maria Ivette Carboni; Niero, Rinaldo; Lucchiari, Pedro Hélio; Souza, Magda D.C.; Bruzzo, Dulcinéia; Alves, Rosely Cabette Barbosa; Miguel, Omar; Bacila, Metry

doi:10.1016/0264-410x(95)93313-x

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“…Buscando reproduzir a metodologia descrita por VOSS et al (1963), projetamos um sistema com algumas modificações fundamentais, descritas por LUCCHIARI (1978), LUCCHIARI e HOSHINO (1980), MALUCELLI et al (1995a e 1985b) e SUGIZAKI et al (1997, onde a câmara de reação foi construída em acrílico, com tampa removível e parafusada ao corpo da câmara (Fig. 1 O eletrodo polarográfico, construído segundo MICKEL et al (1983), é introduzido na câmara através de um orifício na parte central da tampa, e foi montado numa única peça, incluindo no seu interior um sensor de temperatura (Fig.…”

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“…1 O eletrodo polarográfico, construído segundo MICKEL et al (1983), é introduzido na câmara através de um orifício na parte central da tampa, e foi montado numa única peça, incluindo no seu interior um sensor de temperatura (Fig. 2).…”

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“…O circuito eletrônico (Fig.4) do termômetro digital foi o mesmo usado por MALUCELLI et al (1995a), MALUCELLI et al (1995b) e SUGIZAKI et al. (1997.…”

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“…O ganho do amplificador foi ajustado para 10 em P3 e o zero em P4 com a entrada do amplificador em aberto. A saída do A723 fornece uma tensão estabilizada de 2V e o potenciômetro P1 permite o ajuste da tensão de polarização ao valor desejado.O circuito eletrônico (Fig.4) do termômetro digital foi o mesmo usado por MALUCELLI et al (1995a), MALUCELLI et al (1995b) e SUGIZAKI et al. (1997.…”

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“…(1997. O circuito integrado LM334 fornece uma corrente constante que passa pelo diodo 1N914, escolhido como sensor de temperatura pela sua resposta linear da diferença de potencial em função da temperatura, na faixa de 0 a 40 C.O consumo de oxigênio e a temperatura no interior da câmara de reação são registrados num registrador potenciométrico de dois canais e o cálculo da velocidade de consumo de oxigênio e do coeficiente do controle respiratório foram descritos por VILLELA et al (1973), MALUCELLI et al (1995a) e SUGIZAKI et al (1997. Considerou-se, na região linear da curva, arbitrariamente, um segmento de reta correspondente a uma queda na concentração do oxigênio e o respectivo tempo gasto (Fig.…”

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Desenvolvimento De Métodos Físicos Para O Estudo Do Comportamento Bioquímico E Fisiológico De Organismos Antárticos. I. Polarógrafo Com Eletrodo De Oxigênio.

Lucchiari¹,

Malucelli²,

Bacila³

et al. 1998

AVS

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IntroduçãoO oxigênio é um dos elementos químicos mais abundante na face da terra, ocupando cerca de 20% da atmosfera. Descoberto há cerca de 200 anos atrás, constitui a substância mágica que tem fascinado o homem por todos os tempos, sem a qual a vida na terra seria impossível. A importância do oxigênio para a vida despertou no homem o interesse em desenvolver métodos capazes de quantificá-lo. Historicamente, as primeiras medidas relacionadas à quantificação do oxigênio em tecidos e órgãos de animais procuraram determinar o seu consumo, por unidade de peso e tempo, em diferentes condições fisiológicas.O estudo do comportamento bioquímico e fisiológico de organismos antárticos compõe aspectos muito significativos, por estar vinculado principalmente aos mecanismos biológicos de adaptação a temperaturas extremas. Nesse particular, os peixes antárticos, vivendo a temperaturas abaixo de 0 C, fornecem material biológico de extremo interesse para estudos dessa natureza.Com base nessas considerações, propôs-se a criação de metodologia própria para o estudo de diferentes aspectos do comportamento biológico desses animais. Nesse particular, foram projetados e desenvolvidos métodos especiais destinados, principalmente, ao estudo dos processos respiratórios, bem como para analisar os mecanismos oxidativos da respiração em mitocôndria isolada de órgãos e tecidos desses animais.O trabalho de VOSS et al. (1963), em que descrevem um novo modelo de eletrodo de oxigênio, destinado ao estudo da respiração celular e mitocondrial, foi a referência básica para o início dos nossos trabalhos. Materiais e MétodosBuscando reproduzir a metodologia descrita por VOSS et al. (1963), projetamos um sistema com algumas modificações fundamentais, descritas por LUCCHIARI (1978), LUCCHIARI e HOSHINO (1980), MALUCELLI et al. (1995a e 1985b) e SUGIZAKI et al. (1997, onde a câmara de reação foi construída em acrílico, com tampa removível e parafusada ao corpo da câmara (Fig. 1 O eletrodo polarográfico, construído segundo MICKEL et al. (1983), é introduzido na câmara através de um orifício na parte central da tampa, e foi montado numa única peça, incluindo no seu interior um sensor de temperatura (Fig. 2).O circuito eletrônico (Fig. 3) para a medida da corrente polarográfica foi o mesmo utilizado por LUCCHIARI et al. (1984). O ganho do amplificador foi ajustado para 10 em P3 e o zero em P4 com a entrada do amplificador em aberto. A saída do A723 fornece uma tensão estabilizada de 2V e o potenciômetro P1 permite o ajuste da tensão de polarização ao valor desejado.O circuito eletrônico (Fig.4) do termômetro digital foi o mesmo usado por MALUCELLI et al. (1995a), MALUCELLI et al. (1995b) e SUGIZAKI et al. (1997. O circuito integrado LM334 fornece uma corrente constante que passa pelo diodo 1N914, escolhido como sensor de temperatura pela sua resposta linear da diferença de potencial em função da temperatura, na faixa de 0 a 40 C.O consumo de oxigênio e a temperatura no interior da câmara de reação são registrados num registrador potenciométrico de dois...

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“…O circuito eletrônico (Fig.4) do termômetro digital foi o mesmo usado por MALUCELLI et al (1995a), MALUCELLI et al (1995b) e SUGIZAKI et al. (1997.…”

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Desenvolvimento De Métodos Físicos Para O Estudo Do Comportamento Bioquímico E Fisiológico De Organismos Antárticos. I. Polarógrafo Com Eletrodo De Oxigênio.

Lucchiari¹,

Malucelli²,

Bacila³

et al. 1998

AVS

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A Lab‐Built Respirometer for Plant and Animal Cell Culture

Lamboursain¹,

St‐Onge²,

Jolicœur³

2002

Biotechnology Progress

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A very simple off-line respirometer was developed to measure oxygen consumption rates of low respiring and shear-sensitive cell suspensions. The respirometer is composed of a 10 mL glass syringe in which the plunger was substituted with a polarographic dissolved oxygen probe. Mechanical agitation is provided by means of a magnetic stirring bar inside the measuring chamber and a stir plate placed below the respirometer. Abiotic oxygen fluxes occurring in the measurement chamber such as oxygen diffusion and probe oxygen consumption were investigated. The apparent oxygen uptake rate was then corrected for abiotic oxygen fluxes, leading to accurate measurements of respiration rates ranging from 0.5 to 25.0 mM x h(-1). Additionally, the effect of the stirring bar shape and of the test length on the integrity of plant (Eschschzoltzia californica) and animal (NS0) cells was evaluated. Animal cells showed a higher resistance to mechanical stirring inside the respirometer compared to plant cells (0% of broken cells and 78.1% respectively for a polygonal stirring bar and a 15 min test). For plant cells, cell damage inside the measurement chamber was reduced by optimizing the stirring bar shape and reducing the test length to 5 min or less. This very simple design was shown to provide reliable and low-cost quantification of the oxygen uptake rate of plant and animal cells and can be use even for more demanding measurements such as oxygen affinity studies.

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Influence of initial L-asparagine and glycerol concentrations on the batch growth kinetics of Mycobacterium bovis BCG

Leal¹,

Baruque-Ramos²,

Hiss³

et al. 2004

Braz. J. Microbiol.

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The influences of the L-asparagine and glycerol initial concentrations in Sauton medium on the productivities of biomass and colony forming units were studied. The submerged batch cultivations of Mycobacterium bovis were carried out in a 20 L bioreactor. The L-asparagine and glycerol initial concentrations of 4.54 g/L and 25 mL/L, respectively, corresponded to the best biomass productivity, namely 2.5 g/L.day. On the other hand, the concentrations of 2.27 g/L and 25 mL/L, respectively, led to the highest productivity in terms of colony forming units, namely 2.7•10 6 colonies/mg.day. In addition, by means of the relative consumption analysis of L-asparagine and glycerol (50 and 26% respectively), it was concluded that the concentrations of such components could be reduced, with respect to the original Sauton medium composition, aiming the obtainment of an optimal BCG vaccine production in the bioreactor.

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Influence of initial L-asparagine and glycerol concentrations on the batch growth kinetics of Mycobacterium bovis BCG

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