Evaluation of a Competitive ELISA for Detection of Antibodies against Avian Influenza Virus Nucleoprotein

Abstract

A competitive enzyme-linked immunosorbent assay (C-ELISA) employing a baculovirus-expressed recombinant nucleoprotein and a monoclonal antibody was developed for the detection of antibodies to type A influenza virus nucleoprotein. The performance of the C-ELISA was evaluated by testing 756 chickens, 1123 turkeys, 707 emus, and 1261 ostriches, for a total of 3847 serum samples. Relative to the agar gel immunodiffusion (AGID) test, the C-ELISA had a sensitivity of 100% for all four species. The C-ELISA's sensitivity relative to the hemagglutination-inhibition (HI) test results was 100% for chicken, turkey, and emu and 96.2% for the ostrich serum samples. More than 90% of the AGID-negative/C-ELISA-positive serum samples were found positive by HI for at least one influenza serotype. The specificity of C-ELISA relative to AGID ranged from 85.5% to 99.8% for sera collected from these species. These results indicated that the C-ELISA was more sensitive and more specific than the AGID test and as sensitive and as specific as the HI test. The C-ELISA has the potential to replace the AGID test for screening sera from avian species, including ratites, for detection of antibodies to type A influenza virus.

Serologic Evidence of Influenza A Infection in Marine Mammals of Arctic Canada

“…Serologic evidence of influenza A was detected by using a competitive ELISA (C-ELISA) specific to influenza A nucleoprotein (NP) as described by Zhou et al (1998). Briefly, microtiter plates coated with recombinant NP were incubated with a 1:5 dilution of each serum sample immediately followed by addition of the monoclonal antibody to NP.…”

Produção Da Nucleoproteína Recombinante Do Vírus Da Influenza Aviária Para Aplicação No Imunodiagnóstico

“…Existem vários kits comerciais de ELISA disponíveis, tanto na sua forma indireta, como de bloqueio e competitivo, para a detecção de anticorpos contra o VIA e métodos de sanduíche-ELISA que detectam a NP viral, os quais são comumente empregados para o diagnóstico da IA em diversas espécies de aves e também em suínos e outras espécies de mamíferos (CIACCI-ZANELLA, 2010;DE BOER et al, 1990;JIN et al, 2004;ZHOU et al, 1998). Isto se deve ao fato de que, apesar do VIA apresentar uma rápida evolução manifestada na sua extensiva diversidade genética e antigênica entre todos os seus subtipos, o que é típico da maioria dos vírus contendo RNA em seus genomas, o gene que codifica a NP teve ao longo do tempo baixas taxas de modificação de seus nucleotídeos (CHEN et al, 2006;GORMAN et al, 1990;SHU et al, 1993).…”

“…Nesse sentido, foi demonstrado que a clonagem e expressão destas proteínas recombinantes podem ser realizadas por meio de vetores apropriados e em diversos tipos de sistemas de expressão, tais como bactérias, leveduras e células de insetos transfectadas com baculovírus (ABUBAKAR et al, 2011;JIN et al, 2004;SHAFER et al, 1998;ZHOU et al, 1998).…”

“…Por causa disso, constam na literatura muitos estudos nos quais o gene da NP do VIA já foi clonado e expresso, com sucesso, em células de levedura Saccharomyces cerevisiae (UPADHYAY et al, 2009) e Pichia pastoris (ABUBAKAR et al, 2011), em células de insetos transfectadas por vetor constituído de baculovírus (ZHOU et al, 1998;SHAFER et al, 1998), como também em células bacterianas (JIN et al, 2004) e inclusive no sistema E. coli utilizando a mesma linhagem bacteriana que foi utilizada neste trabalho porém empregando um vetor de expressão diferente dos vetores do sistema pET (WU et al, 2007;VELUMANI et al, 2008 Wu et al (2007) do que a concentração ideal que foi utilizada no presente estudo (8 g/mL).…”

A single dose vaccination with an elastase-dependent H1N1 live attenuated swine influenza virus protects pigs from challenge with 2009 pandemic H1N1 virus

“…Infl uenza A virus specifi c antibodies in serum were detected using a competitive ELISA (cELISA) specifi c for the infl uenza A virus nucleoprotein (NP) [23] as well as IDEXX HerdChek SIV Test Kit (IDEXX Laboratories, Westbrook ME). A virus neutralization test (VNT) was conducted in 96-well microtiter plates (Corning Incorporated, NY), according to methods described in "WHO Manual on Animal Infl uenza Surveillance and Diagnosis" [24].…”