Evaluación de un método de extracción y purificación de DNA a partir de tejido muscular fijado en formaldehido de cadáveres no identificados

Abstract

ResumenLa obtención de DNA humano en buena cantidad y alta pureza a partir de tejido muscular fijado en Formaldehido no tamponado es de suma importancia en la amplificación por la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) para su aplicación en estudios de identificación y filiación genética. En este estudio se evaluó la eficiencia del Kit QIAampR DNA FFPE TISSUE y una modificación del mismo basado en lavados con PBS y el tiempo de digestión con proteinasa K, frente a la cantidad y calidad de este ácido nucléico. Las diferencias fueron significativas entre los tiempos de acción con la proteinasa K (PK) en relación a la cantidad y en la pureza producto de los lavados del tejido muscular previa extracción. Estos resultados proporcionan una pauta para el diseño de experimentos de acuerdo con el efecto de la fijación, optimizando recursos humanos e insumos.Palabras clave: Formaldehido, tejido muscular, proteinasa K, lavado celular. EVALUATION OF A METHOD OF EXTRACTING AND PURIFYING DNA FROM MUSCLE TISSUE FIXED IN FORMALDEHYDE UNIDENTIFIED BODIES AbstractObtaining human DNA in large quantity and high purity from muscle tissue fixed in formaldehyde unbuffered is of utmost importance in amplification by Chain Reaction (PCR) for application in identification studies and genetic affiliation. In this study, the efficiency of DNA FFPE TISSUE QIAampR Kit and a modification thereof based washes with PBS and the time of digestion with proteinase K, compared to the amount and quality of the nucleic acid were evaluated. Differences were significant between the exposure times with proteinase K (PK) in relation to the quantity and purity of the product prior washings muscle tissue extraction. These results provide a guideline for the design of experiments according to the effect of fixing, optimizing human resources and inputs.

Bacterias y protozoarios ruminales presentes en ovinos suplementados con probióticos identificados por conteo y PCR punto final

“…Bacterias totales, Fibrobacter succinogenes y hongos anaerobios ruminales se identificaron por PCR punto final; el método consistió en obtener líquido ruminal a través de una sonda 0.5" y 1m de largo unido a una jeringa, esta alícuota fue conservada a -20°C para su posterior procesamiento en el laboratorio. La extracción de ADN se realizó con el kit Ultra Clean Microbial ADN Isolation de MO BIO Laboratories Inc y su cuantificación se llevó a cabo en un espectrofotómetro (NanoDrop ND-1000 LabTech), su pureza fue determinada considerando relaciones de absorbancia de 260/280 y 260/230 nm (Green et al, 2012;Daza et al, 2014). Se realizaron diluciones del ADN extraído de cada muestra, a fin de colocar concentraciones equimolares de 50 ng/µL.…”