EVALUACIÓN DE DOS MÉTODOS DE CRIOPRESERVACIÓN DE EMBRIONES DE LLAMAS SOBRE LAS TASAS DE SUPERVIVENCIA in vivo e in vitro.

Abstract

RESUMENEl objetivo del estudio fue evaluar el efecto de dos métodos de criopreservación sobre la supervivencia in vivo e in vitro de embriones de llama. Se recuperaron 73 embriones en estadio de blastocisto eclosionado mediante una técnica no quirúrgica a los 6.5 días post servicio en llamas superestimuladas. Las llamas receptoras se distribuyeron aleatoriamente en grupo Control (n = 14), de vitrificación (n=30) y de congelación lenta (n=29). Para la vitrificación, los embriones fueron expuestos a la solución de vitrificación (SV) conteniendo 20% Glicerol + 20% Etilenglicol + 0.5M Sucrosa + 10% suero fetal bovino (SFB) + 50 µg/ml sulfato de gentamicina, y sumergidos en nitrógeno líquido dentro de pajillas de 0.25 ml. Para la congelación lenta, los embriones fueron expuestos a fosfato buffer salino (PBS) con 1.5 M de Etilenglicol + 10% de SFB + 50 µg/ml de sulfato de gentamicina, aspirados en pajillas de 0.25 ml, y enfriados a una tasa de descenso de 0.12 °C/min hasta 5 °C y, luego, en la boca del tanque de nitrógeno, se continuó el descenso a una tasa de 5 °C /min hasta -20 °C por 5 min, y luego se sumergieron en el nitrógeno líquido. En la descongelación se utilizaron soluciones de dilución conteniendo dos concentraciones de sucrosa: 0.5 M y 0.2 M para congelación lenta y 0.25 M y 0.12 M para vitrificación. Se realizó una evaluación in vivo a todos los embriones del grupo control y al 50% de los embriones de los dos grupos experimentales, mediante transferencia directa a hembras receptoras previamente sincronizadas. El diagnóstico de preñez se llevó a cabo por ecografía transrectal a los 20 y 30 días. La preñez fue de 4/13, 2/12 y 0/11 para las receptoras de los grupos Control, Vitrificados y Congelación lenta, respectivamente, sin diferencia estadística. Para la evaluación in vitro, los embriones criopreservados fueron cultivados en PBS + 20% SFB, en una atmósfera compuesta por 5% de CO 2 , 20%

Development of a GnRH-PGF2α Based Synchronization and Superstimulation Protocol for Fixed-Time Mating in Llama Embryo Donors

“…They attributed the low results to the implementation of a single natural mating for each superstimulated female. Other studies have used the same ovarian superstimulation treatment, two days after administering GnRH in the presence of a dominant follicle, registering in the case of Vásquez (24), a mean of 6.5 ± 3.1 CLs/female and recovering 4 ± 2.6 embryos/female, while Aller et al (22) observed 5.5 ± 3.1 CLs/female and obtained 2.1 ± 2.2 embryos/female. The embryo recovery rate achieved by Vásquez (24) was similar to that obtained in our study (65.3 vs. 66.7% respectively), both of which were superior to the rate of 40.7% obtained by Aller et al (22).…”

“…Other studies have used the same ovarian superstimulation treatment, two days after administering GnRH in the presence of a dominant follicle, registering in the case of Vásquez (24), a mean of 6.5 ± 3.1 CLs/female and recovering 4 ± 2.6 embryos/female, while Aller et al (22) observed 5.5 ± 3.1 CLs/female and obtained 2.1 ± 2.2 embryos/female. The embryo recovery rate achieved by Vásquez (24) was similar to that obtained in our study (65.3 vs. 66.7% respectively), both of which were superior to the rate of 40.7% obtained by Aller et al (22). Based on inducing ovulation with LH, Huanca et al (26) registered a higher mean of CLs (10.1 ± 2.9 CLs/animal) at the time of embryo recovery after administering eCG two days after LH.…”

“…In this manner, the inhibitory effect on follicular activity of progesterone produced by the CL is achieved (21). There are some protocols to induce multiple follicular growth in llamas based on the application of a single dose (1000 IU) of eCG, at different days after administering GnRH (22)(23)(24) or LH (25,26) to induce ovulation of the dominant growing follicle previously monitored by ultrasound. In the current study, 75% of the llamas responded positively to the superstimulation protocol with a mean 4 CLs per female.…”

Deriva de células epiteliales de tejido de piel descongelado de Ovis canadensis mexicana para la formación de un banco de germoplasma

“…Sin embargo, para llevar a cabo reproducción animal asistida mediante técnicas de transferencia nuclear o para la creación de bibliotecas genómicas, es necesario entender y aplicar adecuadamente las técnicas de conservación de material biológico (Ávila-Portillo et al 2006;León-Quinto et al 2011). Una de estas técnicas es la criopreservación en la cual se almacenan células germinales, somáticas o tejidos, en crioprotectores a bajas temperaturas, permitiendo que a la descongelación, se logren restablecer sus condiciones fisiológicas normales con una considerable tasa de viabilidad (Vásquez et al 2011).…”