Estudos conformacionais de seqüências hidrofóbicas de domínios de receptores acoplados a proteínas G (GPCR) e da proteína G. Um estudo de CD e espectroscopia de fluorescência

Abstract

AgradecimentosAo pessoal do laboratório, Salay, Felipe, Myriam, Fábio Dyszy, Tatiana e Marcelo, obrigado pela paciência e pela ajuda. À Aninha, obrigado pelos papos, discussões e pelo apoio.Ao Carlos Àlvares, que me ajudou muito nos momentos finais.Ao pessoal que passou pelo LBE, Raquel, Berê, Noboru, Roberto Salinas, Goretti, Thelma e Mercedes.Ã Renata Fischer, pela amizade.Ao Claúdio S. Shida, que me ajudou muito em vários momentos, obrigado pelos conselhos e pela amizade.Aos meus amigos Eroc, Paulo, Luís Mayer e Luiz, obrigado pelo apoio e por me agüentar nos momentos mais dificeis.À Lua, que é uma pessoa que eu gosto muito e com a qual tive uma ótima amizade desde o primeiro dia em que entrei no laboratório como aluno de iniciação científica. Obrigado pelos conselhos e pelos momentos de alegria. À Dra. Shirley, que é uma pessoa muito especial. Poucas pessoas sabem contar estórias e atrair a admiração dos outros como você. Com você aprendi muito, sempre admirei sua postura e inteligência. Você também soube ser muito compreensiva nos momentos mais dificeis.À Fapesp e ao CNPq, obrigado pelo apoio finaceiro.o. Índice 1 Índice Lista de abreviações .................................................................................................................................... iv Resumo ........................................................................................................................................................ v O peptídeo estudado mostrou-se muito sensível à força iônica, pH e TFE, observando-se mudança de estrutura ao acaso para a-hélice em alguns pHs e na presença de TFE e para folha ~ com o aumento da força iônica.Na presença de detergentes, observou-se que o peptídeo era capaz de ligar-se tanto a interfaces com carga líquida zero (HPS e LPC) quanto com carga líquida negativa. Observou-se também que o CG tem maior afinidade por LPC do que por HPS.O estudo do CG em diferentes condições forneceu subsídios para investigannos a interação deste fragmento com regiões do receptor A TIA de angiotensina 11 que estão envolvidas com a ativação da proteína G. analog displayed the highest propensity to acquire a-helical conformation in the presence of TFE and in aqueous solution.In the presence of detergents we observed that the peptides were able to bind to different interfaces, especially negatively charged ones. In the presence of phospholipid membranes, all peptides displayed p-sheet conformation.In order to study the effect of aggregation, we performed experiments in the presence of denaturing agents such as urea and as a function of temperature. Even in the presence of high urea concentrations and at higher temperatures, the fragments remained aggregated. This result led us to another approach, where peptide films were hydrated in the presence of detergents. Using this methodology it was observed that the fragments were less aggregated, indicating that under adequate conditions the peptides tend to adopt a-helical conformation. In summary, it was possible to observe experimentall...