Estudo da influência de TGF beta na família let7 em células gliais de Müller.

Abstract

Estudo da influência de TGF beta na família let7 em células gliais de Müller Tese apresentada ao Programa de Pósgraduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento/Tecidual do Instituto de Ciências Biomédicas da Universidade de São Paulo, para obtenção do Título de Doutor em Ciências. São Paulo 2018 RESUMO Wu, DC. Estudo da influência de TGF beta sobre miRNAs da família let7 em células gliais de Müller. [Tese (Doutorado em Ciências) ]-Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2018. O vítreo apresenta remodelamento de seus componentes durante a patogênese de doenças como descolamento de retina, buraco de mácula e membrana epirretínica e os fatores que levam a essas alterações ainda não são completamente conhecidos. As células gliais de Müller exercem um papel regulatório importante na retina, principalmente na produção de TGF-beta, e participam na formação de membranas contráteis em doenças da interface vítreo retínica. O TGF-beta está aumentado tanto na retina como no vítreo, em condições de doença, tendo o papel importante de ativar a capacidade contrátil na interface do tecidos estudados. MicroRNAs são moléculas de RNA fita simples de 19-25 nucleotídeos, endógenos, não codificantes e potentes reguladores pós-transcricional da expressão gênica, portanto potenciais alvos terapêuticos eficientes para o tratamento das doenças da interface vítreo-retínica. Em linhagem de células de Müller de rato (rMC-1), o tratamento com TGF-β1 em concentração de 5 ng/ml leva a diminuição da expressão gênica de let7-b e let7-c, após 24 horas de tratamento. Já em linhagem humana de Müller ( MIO-M1), a expressão gênica de let-7b e let-7c foi alterada com 10 ng/ml de TGF-β1 e TGF-β2. TGF-β2 induziu a uma queda da expressão de let-7b e let-7c, que variou entre 70% e 40 % , após 24 e 48 horas de tratamento. Investigamos os possíveis alvos desses miRNAs, COL1A1, COL1A2 e HAS2, proteínas que possuem relação com as alterações da interface vítreo-retiniana. Entretanto, a análise da expressão de RNAm de COL1A1 e COL1A2 após a estimulação de MIO-M1 com TGF-β1 e TGF-β2 não apresentou alterações. No estudo com gene reporter de luciferase validamos COL1A2 como um novo alvo de let-7b na célula de Müller. Nos estudos funcionais observamos que o let-7c mimético diminui a contração do gel de colágeno, Dessa forma, neste estudo concluímos que o micro-ambiente das células de Müller nas doenças da interface vítreo-retiniana, pode alterar a expressão dos miRNAs da família let7 e, consequentemente, levar à formação de membranas densas e contráteis. Palavras-chave: MicroRNAs. Retina. Fator de crescimento. TGF-beta. Let-7. ABSTRACT Wu, DC. TGF beta modulateslet-7miRNAs expression in Muller glial cells. [thesis (PhD in Sciences) ]-Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2018.Vitreous remodeling occurs during disease pathogenesis, such as retinal detachment, macular hole and epiretinal membrane, and the factors that lead to these alterations are still not fully determined. Müller glial cells regula...