Ensayo cuantitativo para la determinación de la actividad hidrolítica de la enzima biotinidasa

Abstract

.aoorniorio ac I P~ 7aje k~o n a l a . i e o i i o le irill.. I( e~.sü/(> . a r I Z <~. <~O ; I .:.."a nsi ii.10 ni. t.; en-i-is YIISICJS : Pre? I~. . c~s / C I O~~J (it C. i~~i C t~i f i a r n e o~~ ae inm..no og a a Habana, Cuba.El presente trabajo describe la estandarización de un ensayo diseñado para cuantificar la actividad hidrolitica de la enzima biotinidasa en muestras de suero humano, el cual se basa en el método de Wolf y colaboradores, que emplea el N-biotinil-p-aminobenzoico (BPABA) como sustrato. Con la adición de detergentes a la solución de nitrito de sodio, se eliminan las burbujas de nitrógeno formadas durante la reacción de diazotación y se mejora la precisión del ensayo. Se observó que la congelación-descongelación de las muestras de suero no afecta la actividad hidrolitica de la enzima biotinidasa. La evaluación de la interferencia de fármacos en el ensayo mostró que con el sulfametoxasolltrimetoprim y la procainal benzilpenicilina hay desarrollo de color en ausencia del sustrato BPABA. Los valores promedio de actividad hidrolitica de la biotinidasa, obtenidos en un grupo de 205 niños sanos, fue de 7,04 i-2,2 nmol/min/ml. No se encontraron diferencias estadisticamente significativas al evaluar la actividad de la enzima por sexo, raza y grupos de edad. Este ensayo se puede emplear en la determinación de la actividad hidrolitica de la enzima biotinidasa en muestras de suero humano y, específicamente, en la confirmación de los casos detectados por los programas de tamizaje neonatal para la deficiencia de biotinidasa.Palabras clave: deficiencia de biotinidasa, ensayo colorimétrico, tamizaje neonatal.Quantitative assay to determine the hydrolytic activity of biotinidase A quantitative assay was standardized to determine the hydrolytic activity of biotinidase in human serum samples. The current Wolf et al. assay uses N-biotinyl-p-aminobenzoic acid as substrate. The assay's precision was improved by the addition of detergents to the sodium nitrite solution. This eliminated the formation of nitrogen bubbles during the diazotation reaction. Freezing and thawing of the serum samples did not affect the hydrolytic activity Farmaco's interference test showed positive results with sulfametoxasoi/trimetoprima and procainel benzylpenicilline. The hydrolytic activity of biotinidase averaged 7.04 ' 2.2 nmol/min/ml in a group of 205 healthy children. No statistically significant differences in enzymatic activity was observed between variables of sex, races and age group. The standardize assay can determine the hydrolytic activity of biotinidase human serum samples and can confirm the positive cases detected by neonatal screening programs for biotinidase deficiency.Key words: Biotinidase deficiency, colorimetric assay, neonatal screening.Uno de los errores innatos del metabolismo de la biotinidasa. Descrita en la década de los 50, la biotina lo constituye la deficiencia de la enzima biotinidasa e s la enzima encargada del reciclaje Correspondencia: d e la biocitina obtenida de la degradación de las ~~~~~t~ C. ~~...