Effects of Lys-form of plasminogen on platelet actin cytoskeleton

Roka-Moya³

et al. 2015

Fiziol Zh

ВСТУППлазміноген/плазмінова система відіграє ключову роль у руйнуванні фібринових згустків та підтриманні гемостатичного балансу крові. Припускається, що протеїни, які входять до складу цієї системи, також лімітують надмірне тромбоутворення, ре-гулюючи клітинну ланку гемостазу [1,2]. Нативна форма молекули (Glu-плазміноген) є неактивним попередником ключової про-теїнази фібринолітичної системи плазміну (EC 3.4.21.7). Крім того, обмежений проте-оліз Glu-плазміногену призводить до появи низки фрагментованих молекул, які здатні виконувати самостійні фізіологічні функції. Так, у результаті гідролізу плазміном пептид-ного зв'язку Lys77-Lys78 (рідше Lys78-Val79, Arg68-Мet69) та відщеплення фінгер-домену Glu-плазміноген перетворюється на частко-во деградовану форму -Lys-плазміноген, що має більш відкриту конформацією. Він характеризується більш високою швидкістю активації та спорідненістю до фібрину і мем-бранних рецепторів порівняно з нативним плазміногеном [3]. Наявність структурно-конформаційних особливостей Lys-плазмі-ногену може зумовлювати унікальні функції цього протеїну, які не притаманні вихідній молекулі.Питання щодо механізмів утворення Lys-плазміногену в організмі, а також його фізіологічної ролі, досліджені недостатньо. Доведено принципову можливість його ут-ворення з нативного проензиму на поверхні деяких клітин крові, зокрема тромбоцитів [4,5]. Як відомо, тромбоцитарна плазма-тична мембрана містить сайти зв'язування для плазміногену і протеїназ-активаторів. Кількість плазміногенових «рецепторів», які експонуються на поверхні тромбоцитів, значно зростає в результаті їх активації [6,7]. Потенційна роль Lys-плазміногену у регуля-ції функціональної активності тромбоцитів досліджено недостатньо. Наші попередні експериментальні дані демонструють, що Lys-, на відміну від Glu-плазміногену, при-гнічує агрегацію відмитих тромбоцитів лю-

Section: вступunclassified

Section: методикаunclassified

Section: результати та їх обговоренняunclassified

See 3 more Smart Citations

The Effects of Lys-Plasminogen on Human Platelet Secretion

Roka-Moya³

et al. 2015

Fiziol Zh

Plasminogen modulates formation of reactive oxygen species in human platelets

Guzyk³

et al. 2018

Ukr.Biochem.J

reactive oxygen species (roS) are considered to be important signalling molecules controlling many platelet functions. roS production has been shown to be augmented by platelet activation, however, plasminogen (Pg) has not been studied in the context of modulating intraplatelet roS levels. The aim of this study was to investigate the ability of different Pg forms to affect platelet metabolic activity/survival and intracellular roS production in resting and activated platelets. Platelets isolated from donor plasma were pre-treated with Glu-or Lys-Pg (1.2 µM) and activated by thrombin (1.0 NIH unit/ml) or collagen (1.25 mg/ ml). mTT assay was adapted to estimate total mitochondrial dehydrogenase activity, while intracellular roS levels were monitored with the use of h 2 DCF-DA probe by flow cytometry. Lys-Pg was shown to slightly, but significantly, mitigate MTT reduction (P < 0.05 vs. control platelets). Twofold elevation in metabolic activity of platelets stimulated by thrombin as compared to untreated cells was observed. however, this activation was less exhibi ted in the case of platelets pre-incubated with either Glu-of Lys-Pg, with a predominant effect of Lys-Pg. Unlike thrombin, collagen treatment dramatically suppressed metabolic activity of platelets by 60% compared to control (P < 0.05). Glu-or Lys-Pg pre-incubation had no effects on the activity of collagenstimulated platelets. Two subpopulations of platelets were observed with distinct characteristics of intracellular roS formation. elevated roS production was demonstrated in these populations of both thrombin-and collagen-treated platelets. Pg (Lys-form to greater extent) enhanced intracellular roS generation in thrombin-stimulated platelets. These findings suggest that augmented ROS generation within platelets pre-treated with Pg followed by their stimulation may result in down-regulation of their survival and functional activity. This study adds to our understanding one more possible mechanism of Pg impact on the platelet function. k e y w o r d s: plasminogen, platelets, reactive oxygen species (roS), h 2 DCF-DA, flow cytometry, MTT test.

Plasminogen modulates formation and release of platelet angiogenic regulators

Grinenko³

2020

Ukr.Biochem.J

Platelets store, produce and release a variety of angiogenesis regulators, which can contribute to both normal tissue repair and angiopathy-associated pathologies. Plasminogen has been earlier shown to regulate some platelet functions, but if it is able to modulate angiogenic capacities of platelets is still poorly studied. Thus, the aim of the present study was to evaluate the effects of different plasminogen forms on the formation and secretion of angiogenic protein regulators by platelets. human washed platelets were obtained by gelfiltration on Sepharose-2B. The levels of P-selectin (CD-62P) exposed on the plasma membrane of untreated and activated platelets was monitored by flow cytometry. Secretion of platelet-derived vascular endothelial growth factor (VEGF) as well as plasminogen fragmentation and angiostatin formation by intact platelets and platelet plasma membranes were analyzed by immunoblotting. It was shown that thrombin or collagen exposure resulted in enhanced P-selectin surface expression by platelets, while Lys-form of plasminogen reduced agonist-induced platelet secretion. Lys-plasminogen, but not Glu-form, inhibited agonist-induced VEGF release from platelets. Activation of platelets significantly accelerated plasminogen cleavage and angiostatin formation. Anti-actin antibodies inhibited plasminogen fragmentation during incubation with platelet plasma membranes indicating surface-exposed actin participation in plasminogen conversion to angiostatins. The present study uncovers a novel function of plasminogen to limit angiogenic potential of platelets via angiostatin formation and inhibition of VEGF secretion. K e y w o r d s: plasminogen, platelets, angiogenesis, vascular endothelial growth factor (VEGF), angiostatins.