Effects of cryopreservation on phosphatidylserine translocation, intracellular hydrogen peroxide, and DNA integrity in canine sperm

Kim, Sue-Hee; Yu, Dong; Kim, Yong-Jun

doi:10.1016/j.theriogenology.2009.09.011

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“…El parámetro más elemental que determina el efecto de la congelación sobre la función espermática es la motilidad progresiva, en nuestro estudio las motilidades progresivas en el control y grupos experimentales fueron superiores a las reportadas previamente para espermatozoides congelados/ descongelados de canino, utilizando el método convencional (Rota et al, 2010;Kim et al, 2010). La motilidad fue el úni-co parámetro espermático en el cual se presentaron diferencias significativas entre la técnica convencional y los experimentales.…”

Section: Discussionunclassified

“…El tiempo estimado desde la colecta de semen hasta el paso previo a la congelación fue 80 min aproximados. Tres diferentes protocolos de congelación y almacenamiento fueron aplicados: Control: Las pajuelas fueron congeladas y almacenadas en N 2 L (Kim et al, 2010). Exp.…”

Section: Materials Y Métodounclassified

“…Se determinó la motilidad progresiva post descongelación utilizando 10 µl de suspensión espermática en un portaobjeto bajo microscopio óptico (Axiolab drd, KT 450905, Zeiss), con platina temperada (37ºC) y condensador de contraste de fases a 400x. El porcentaje de espermatozoides con motilidad progresiva se determinó considerando los grados 3 y 4 dentro de una escala de 0 a 4 (Risopatrón et al, 2002;Kim et al). El promedio de las diez sucesivas estimaciones fue registrado como porcentaje de motilidad progresiva.…”

Section: Motilidad (Mop)unclassified

“…La congelación provoca daño en el ADN de espermatozoides de caninos (Rota et al, 2005;Kim et al, 2010). En este primer estudio que evalúa la integridad del ADN en espermatozoides congelados en un ultracongelador de -80ºC a una velocidad de -10ºC/min, no se encontró diferencias significativas entre los resultados de los tres protocolos ensayados.…”

Section: Y Benson Et Alunclassified

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Criopreservación de Espermatozoides Caninos a - 80C

2013

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RESUMEN. La congelación y almacenamiento en nitrógeno líquido (N 2 L) es la técnica más utilizada para preservar el semen de canino y de otras especies domésticas durante largos períodos de tiempo. Este estudio fue diseñado para validar el uso del ultracongelador de -80ºC para congelar y almacenar semen canino en pajuelas. Tres protocolos fueron ensayados (n=10): Control: semen congelado y almacenado en N 2 L; Exp. 1: semen congelado y almacenado -80ºC, y Exp.2: semen congelado a -80ºC y almacenado en N 2 L. Postdescongelación se evaluó por citometría de flujo la viabilidad e integridad de membrana plasmática (SYBR-14/PI), potencial de membrana mitocondrial (∆Ψm; JC-1), integridad de la membrana del acrosoma (PSA/FITC-PI), translocación de fosfatidilserina (Annexin-V-FITC/PI) y fragmentación del ADN (TUNEL). No se observaron diferencias significativas (P<0,05) entre los grupos Control, Exp.1 y Exp.2 respecto a: integridad de membrana plasmática intacta (42,2 ± 5,3; 35,57 ± 10,3 y 40,76 ± 12,1; respectivamente), ∆Ψm normal (54,7 ± 20,6; 44,4 ± 15,8 y 43,4 ± 15,3 respectivamente), membrana acrosomal intacta (42,9 ± 11,1; 53,2 ± 15,8 y 48,7 ± 20,1 respectivamente) y ADN fragmentado (0,87 ± 0,41; 0,75 ± 0,16; 0,79 ± 0,27 respectivamente). Sin embargo, el promedio de la motilidad progresiva postdescongelación de los grupos E1 y E2 (37,0 ± 4,4%; 36,8 ± 4,1% respectivamente) demostraron diferencias (P<0,05) respecto al grupo Control (55,9 ± 8,7%). Los resultados obtenidos en el presente estudio demostraron que la utilización del ultracongelador de -80ºC para congelar y almacenar espermatozoides caninos tiene un uso potencial en medicina veterinaria como alternativa a la utilización del N 2 L. PALABRAS CLAVE: Canino; Espermatozoide; Congelación; Ultracongelador de -80ºC. INTRODUCCIÓNEn caninos, la congelación y conservación de espermatozoides por periodos prolongados de tiempo se realiza en nitrógeno líquido (N 2 L) (Alamo et al., 2005). Además, han sido utilizadas técnicas alternativas para el procedimiento de congelación como el hielo seco y ultra-congeladores programables para conservar muestras de semen, sin embargo el almacenamiento es en N 2 L (Olar et al., 1989;Hay et al., 1997;Thomas et al., 1993).Ha sido determinada la función espermática en ultracongeladores de -152ºC utilizando parámetros como la motilidad, reacción del acrosoma y morfoanomalías (Ála-mo et al.;Batista et al., 2006). Sin embargo, no existen antecedentes de la utilización del ultracongelador de -80ºC, para congelar semen canino en pajuelas convencionales por periodos cortos como alternativa a la técnica convencional de congelación en N 2 L. En este estudio se evalúa el efecto de la temperatura de congelación y almacenamiento a -80ºC, en comparación al método convencional de congelación y almacenamiento en N 2 L, sobre parámetros esenciales de la función del espermatozoide de canino, tales como motilidad progresiva, funcionalidad de membranas (plasmática, acrosomal y mitocondrial) y fragmentación del ADN. MATERIAL Y MÉTODOAnimales. Se utilizaron...

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Section: Discussionunclassified

Section: Materials Y Métodounclassified

Section: Motilidad (Mop)unclassified

Section: Y Benson Et Alunclassified

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Criopreservación de Espermatozoides Caninos a - 80C

2013

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“…The freezing-thawing of human (Glander & Schaller, 1999), bull (Martin et al, 2004), and boar (Pena et al, 2003), stallion (Ortega Ferrusola et al, 2008), and dog (Kim et al, 2010) spermatozoa induces membrane PS translocation, what demonstrates that cryopreservation leads to apoptosis. Therefore, detecting early phases of membrane dysfunction, or initial phases of apoptosis of viable spermatozoa, would be important when evaluating stressed spermatozoa, such as those subjected to freezing and thawing, and would be useful for controlling freezing procedures in semen.…”

Section: Apoptotic Changesmentioning

confidence: 94%