Effect of semen preparation on casa motility results in cryopreserved bull spermatozoa

Contri, Alberto; Valorz, Claudio; Faustini, M.; Wegher, Laura; Carluccio, Augusto

doi:10.1016/j.theriogenology.2010.02.025

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“…O set up do equipamento para análise do sêmen foi pré-ajustado com os seguintes parâmetros: número de frames captados: 60; frames por segundo: 60 Hz; contraste mínimo: 60; tamanho mínimo da célula: 6 pixels; VAP (path velocity): 38,0 µm/s; STR (straightness): 60,0%; VAP cutoff: 30,0 µm/s; VSL cutoff: 20,0 µm/s; tamanho da célula: 6 pixels; intensidade da célula: 80; magnificação: 1,89; frequência de vídeo: 60 Hz; intensidade de iluminação: 2150; temperatura: 37ºC. As seguintes variáveis de movimento das células espermáticas foram avaliadas: motilidade total (MOT-T, %) e motilidade progressiva (MOT-P, %); velocidade média do trajeto (VAP, µm/s); velocidade curvilinear (VCL, µm/s); velocidade linear progressiva (VSL, µm/s); amplitude de deslocamento lateral da cabeça (ALH, µm); frequência de batimento flagelar cruzado (BCF, Hz); retilinearidade (STR, %) e linearidade (LIN, %) (CONTRI et al, 2010).…”

Section: Avaliação Computadorizada Da Motilidade E Parâmetros De Cinéunclassified

“…Para as variáveis que designam a cinética dos espermatozoides, houve influência da suplementação lipídica após o processo descongelação em três parâmetros (BCF, STR e LIN), os quais indicam, em conjunto, a habilidade de progressão dos espermatozoides em um determinado trajeto (CONTRI et al, 2010). O BCF, que já foi apontado como sendo correspondente ao vigor das células espermáticas (CONTRI et al, 2010), foi positivamente influenciado pela suplementação com ácidos graxos insaturados, com diferença entre grupos notada a partir de 90 dias do início da suplementação, ou seja, a partir da segunda espermatogênese completa sob efeito da dieta, uma vez que para o touro bubalino um ciclo espermatogênico completo e o tempo de armazenamento no epidídimo levam, em média, 48 dias (FRANÇA; AVELAR; ALMEIDA, 2005).…”

Section: Pi_h342 (%) E_n (%)unclassified

“…O BCF, que já foi apontado como sendo correspondente ao vigor das células espermáticas (CONTRI et al, 2010), foi positivamente influenciado pela suplementação com ácidos graxos insaturados, com diferença entre grupos notada a partir de 90 dias do início da suplementação, ou seja, a partir da segunda espermatogênese completa sob efeito da dieta, uma vez que para o touro bubalino um ciclo espermatogênico completo e o tempo de armazenamento no epidídimo levam, em média, 48 dias (FRANÇA; AVELAR; ALMEIDA, 2005).…”

Section: Pi_h342 (%) E_n (%)unclassified

“…Normalmente, as avaliações mais rotineiras realizadas para determinar a qualidade seminal englobam os testes de motilidade e morfologia espermática (MAZIERO et al, 2009), além de técnicas para avaliar a integridade e função da membrana plasmática do espermatozoide, como o teste de eosina-nigrosina e o teste hiposmótico (BARROS et al, 2007;SELVARAJU;GHOSH;RAVINDRA, 2009). De forma complementar, técnicas mais elaboradas foram desenvolvidas mais recentemente para aumentar o grau de precisão das avaliações andrológicas, como a análise computadorizada da motilidade espermática (CASA -Computer Assisted Sperm Analisys) (CONTRI et al, 2010;CONTRI et al, 2013;HUSSAIN;LESSARD;ANZAR, 2013) e as técnicas baseadas no uso de sondas fluorescentes (CELEGHINI et al, 2007;KOONJAENAK et al, 2007).…”

Section: Introductionunclassified

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A suplementação alimentar com ácidos graxos insaturados melhora a qualidade do sêmen criopreservado de búfalos (Bubalus bubalis) pós descongelação

et al. 2014

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This research aimed to evaluate the effect of inclusion unsaturated fatty acids (UFAs) in the buffalo diet, on the sperm quality after thawing. In parallel, it was verified the degree of association among techniques to assess plasma membrane integrity (PMI) of spermatozoa. Patterns of sperm motility (subjective and computer-assisted analysis), kinetics, morphology and plasma membrane integrity were evaluated. The hypo-osmotic swelling test, nigrosin-eosin staining (E-N) and fluorescent probes propidium iodide/Hoechst 33342 (IP-H342) were adopted to evaluate PMI. The study was planned considering two experimental groups, which were evaluated in repeated measures design. over time. Eleven Murrah buffalo bulls (3.5±1.0 years, and 536.9±73.0 kg) were divided in Control Group (CONT, n=5) and Palm Oil Group (PO, n=6). Animals were fed with forage and concentrated in a controlled manner. Animals of PO received dietary supplementation containing palm oil (2% of dry matter). Dietary consumption was daily monitored and the intake level of UFAs in PO was 55.4% higher than CONT. Semen samples were collected and evaluated every 14 days. The experiment lasted 120 days, considering four periods of 30 days each (Periods I, II, III and IV) and repeated measures structure was used in statistical analysis. Significance level adopted was 5%. There was no effect of treatment on sperm motility (P>0.05), but palm oil supplementation presented a positive effect on spermatic ability to progress (derived from BCF, STR and LIN) in Period IV (P<0.05). High correlation (91%) was observed between IP-H342 and E-N techniques (Y = 0.9155 x + 2.9843, R 2 = 0.82, P≤0.05). Thus, supplementation with UFAs increased the progressivity of spermatozoa after 90 days, and had no effect on other seminal parameters. Eosin-nigrosin stain can be used efficiently as a predictor of the level of PMI when conditions for implementing fluorescent probes not present.

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Section: Avaliação Computadorizada Da Motilidade E Parâmetros De Cinéunclassified

Section: Pi_h342 (%) E_n (%)unclassified

Section: Introductionunclassified

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A suplementação alimentar com ácidos graxos insaturados melhora a qualidade do sêmen criopreservado de búfalos (Bubalus bubalis) pós descongelação

et al. 2014

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“…In order to improve these deficiencies inherent in the Neubauer methodology new techniques involving CASA technology are increasingly found in large semen production facilities (MAES et al, 2010;PRATHALINGAM et al, 2006). One of the biggest advantages of computer analysis is the fact of all the CASA systems works similarly, reconstructing the spermatozoon trajectory from instant images, in which the software detects the sperm head (CONTRI et al, 2010). For the concentration, the software utilized the same concept, identifying each sperm in the field, guaranteeing high sensitivity in the analysis and high correlation and concordance with the hemocitometer count, according to this study.…”

Section: Discussionmentioning

confidence: 99%

Avaliação da sensibilidade da técnica computadorizada de análise (CASA) para a determinação da concentração espermática do sêmen bovino congelado

Crespilho

Chiaradia

Cortéz

et al. 2017

Braz. J. Vet. Res. Anim. Sci.

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Sperm concentration is traditionally evaluated by counting cells in a hemocytometric Neubauer chamber, often a highly subjective, time-consuming, and laborious technique prevalent in andrology laboratories around the world. However, the Computer-Assisted Semen Analysis (CASA) represents a more consistent method of evaluating sperm concentration that may provide enhancing efficiencies of sperm count. The purpose of this study is to compare the results of these two methods in the analysis of post-thaw concentration of bovine semen. Four hundred and twenty five batches of semen from different bulls were selected, thawed at 37°C for 30 seconds and then homogenized. Aliquots of 40 μL of semen were diluted in 960 μL of distilled water, fixing the rate at 1:25 dilution for analysis in a Neubauer chamber. Conversely, aliquots of 5 μL for each semen dose were submitted to CASA, considered a minimum of five random fields and 2000 sperm count per analysis. The average concentration of sperm cells was 38.96 a ± 1.28 in the Neubauer analysis and 35.14 b ± 0.82 for the CASA, with the correlation coefficient of 0.87 (P < 0.0001) and reliability of 0.78 (scale ranging from 0 to 1) between the two methods. In conclusion, the results of two techniques for assessing sperm concentration have similar results. However the CASA methodology would yield greater benefit due to precision, consistency, and reduced disposal issues, particularly for large processing laboratories. Keywords: Bull semen. CASA. Neubauer. Sperm concentration. ResumoTradicionalmente, a concentração espermática é avaliada por meio da contagem de células em câmara hemocitométrica de Neubauer, técnica laboriosa adotada na rotina dos laboratórios de andrologia. Uma alternativa para essa contagem é a técnica computadorizada de avaliação espermática (CASA), método que pode aumentar a eficiência e acurácia na determinação da concentração de espermatozoides em uma amostra de sêmen. O presente trabalho relata a avaliação da sensibilidade da técnica CASA para o acesso da concentração de espermatozoides bovinos em pós-descongelação. Foram selecionadas 425 doses de sêmen de reprodutores de diferentes raças, descongeladas a 37°C por 30 segundos e homogeneizadas. Alíquotas de 40 µL de sêmen foram transferidas para tubos cônicos de 1,5 mL previamente preenchidos com 960 µL de água destilada, fixando a taxa de diluição em 1:25 para contagem em câmara de Neubauer. Em contrapartida, alíquotas de 5 µL de cada dose de sêmen foram avaliadas com o emprego do sistema CASA considerando o número mínimo de cinco campos aleatórios e 2 mil espermatozoides por análise. A concentração média de células espermáticas foi de 38,96 a ± 1,28 e 35,14 b ± 0,82, respectivamente para amostras avaliadas em câmara de Neubauer ou sistema computadorizado, apresentando o coeficiente de correlação de 0,87 (P < 0.0001) e concordância de 0,78 (escala de 0 a 1). Conclui-se que as duas técnicas de avaliação da concentração espermática possuem eficiência similar. No entanto, em virtude da precisão, rapidez...

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Bovine Semen Quality Control in Artificial Insemination Centers

Vincent

Underwood

Dolbec

et al. 2014

Bovine Reproduction

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Quality control (QC) is a fundamental area of management for semen production centers (SPCs) supplying bovine semen to breeders and producers. Semen production centers are moving away from subjective semen assessment, that is largely uncorrelated to field fertility, to objective semen analyses that incorporate computer assisted sperm analysis (CASA) and flow cytometry. A multiparametric approach to semen analysis using a combination of CASA and flow cytometry can provide SPCs with the highest QC for all semen production. In this paper we review probes used for labelling spermatozoa for viability, acrosomal integrity, mitochondrial activity, DNA integrity and calcium release. Limitations of CASA and flow cytometry when analyzing spermatozoa, especially frozen-thawed samples, are discussed. Finally, we described how a multiparametric approach using CASA and flow cytometry could be applied in SPCs to establish QC of production before the release of the product in the field.

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Effect of semen preparation on casa motility results in cryopreserved bull spermatozoa

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A suplementação alimentar com ácidos graxos insaturados melhora a qualidade do sêmen criopreservado de búfalos (Bubalus bubalis) pós descongelação

A suplementação alimentar com ácidos graxos insaturados melhora a qualidade do sêmen criopreservado de búfalos (Bubalus bubalis) pós descongelação

Avaliação da sensibilidade da técnica computadorizada de análise (CASA) para a determinação da concentração espermática do sêmen bovino congelado

Bovine Semen Quality Control in Artificial Insemination Centers

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