. Após a diluição o sêmen foi envasado em palhetas e refrigerado nos três diluidores e criopreservado utilizando somente os meios Botubov ® e Steridyl ® . A refrigeração do sêmen foi realizada a 5º C por até 48 horas em sistema passivo de refrigeração BotuFlex ® e a criopreservação realizada em sistema automatizado TK 3.000 ® . O sêmen foi avaliado nos tempos 0, 24, 36 e 48 horas após a refrigeração e após a descongelação, para cada diluidor. Foram realizadas análises dos padrões de cinética espermática pelo sistema computadorizado de análise espermática (CASA, programa SCA -Sperm Class Analyser), integridade das membranas plasmática e acrossomal, potencial de membrana mitocondrial e estresse oxidativo por sondas fluorescentes, sob microscopia de epifluorescência e morfologia espermática por microscopia de contraste de interferência diferencial (DIC). Notou-se efeito de tempo de refrigeração para os três diluidores de 0 para 24h, se mantendo semelhante até 48 h. Os diluidores Botubov ® e Steridyl ® preservaram as características espermáticas de forma semelhante até 48 horas de refrigeração diferindo apenas na variável de velocidade curvilinear; no entanto, ambos foram superiores ao diluidor Bovidyl ® , para as variáveis, motilidade total, motilidade progressiva, células rápidas, velocidade curvilinear, velocidade progressiva, velocidade do trajeto, retilinearidade, integridade da membrana plasmática, alto potencial de mitocondrial e espermatozoides com membranas plasmática e acrossomal íntegras e alto potencial mitocondrial. O segundo experimento foi realizado, baseado nos resultados do primeiro experimento, para avaliar os efeitos da refrigeração e da criopreservação do sêmen sobre a fertilidade in vivo. Foram utilizados ejaculados de três touros das raças Brangus, Braford e Angus, com idade entre 5 e 7 anos. O sêmen foi colhido por meio de vagina artificial, o ejaculado foi dividido em três alíquotas, sendo duas alíquotas para refrigeração e uma para criopreservação. Para a refrigeração o sêmen foi diluído nas concentrações de 15x10 6 (R15) e 30x10 6 (R30) espermatozoides/palheta e para a criopreservação diluído na concentração de 30x10 6 espermatozoides/palheta (CRIO). Para todas as diluições foi utilizado o meio Botubov ® e o sêmen armazenado em palhetas de 0,5 mL. A refrigeração foi realizada a temperatura de 5º C por 48 horas em sistema passivo de refrigeração BotuFlex ® e a criopreservação em sistema automatizado TK ® . Foram sincronizadas 552 vacas da raça Brangus em programas de inseminação artificial em tempo fixo. Os resultados da taxa de prenhez para os grupos de vacas inseminadas foram de 49,4% para R15, 43,38% para R30 e 47,59% para o sêmen criopreservado. Pode-se concluir que a refrigeração do sêmen a 5º C por 48 horas resulta em taxa de prenhez semelhante às obtidas com o sêmen criopreservado, sendo que esses resultados indicam que a refrigeração por até 48 horas pode ser uma opção de uso para IATF. The objective of the present study was to evaluate the viability of cooling bovine semen compared ...