Doppelte und dreifache In‐vivo‐Funktionalisierung von Proteinen mit synthetischen Aminosäuren

Abstract

Statt vieler Schritte nur einer: Die hier vorgestellte Methode ermöglicht den simultanen In‐vivo‐Einbau von zwei oder drei verschiedenen synthetischen Aminosäuren in ein Protein in einem einzigen Expressionsexperiment unter Verwendung polyauxotropher Escherichia‐coli‐Stämme. Im Bild ist das genutzte Modellprotein ψ‐b* mit den ausgetauschten Aminosäuren gezeigt.

Congeneric Lantibiotics from Ribosomal In Vivo Peptide Synthesis with Noncanonical Amino Acids

“…Thereby, Pro was replaced by (4R-OH)Pro (trans-4-hydroxyproline), (4S-F)/ (4R-F)Pro (cis-and trans-4-fluoroproline), and (S)Pro (lthioproline). Trp analogues (4-F)Trp (4-fluorotryptophan), (5-OH)Trp (5-hydroxytryptophan), and (7-Aza)Trp (7-azatryptophan) were translated into lichenicidin using fermentation and expression procedures described by Lepthien et al [18] Expectedly, the mass spectrometric analysis clearly showed high levels of incorporation for all these analogues at the defined positions ( Figure S2 in the Supporting Information). These experiments demonstrate the general applicability of our approach for the structural and chemical diversification of ribosomally synthesized lantibiotics.…”

In Vivo Incorporation of Multiple Noncanonical Amino Acids into Proteins

“…[17,18] However, it would be extremely difficult to carry out equivalent experiments (i.e. [17,18] However, it would be extremely difficult to carry out equivalent experiments (i.e.…”

Paralleler In‐vivo‐Einbau von mehreren nichtkanonischen Aminosäuren in Proteine

“…[17][18] [21] Bei der Invitro-Translation werden oft chemisch oder enzymatisch fehlacylierte Suppressor-tRNAs als molekulare Hilfsmittel genutzt, um die Translation zu manipulieren. Die Gruppen um Sisido [22] und Forster [23] [24] Zum Thema In-vitro-Neuzuordnung von Codons wird auf die exzellenten Studien in der Literatur verwiesen.…”