DNA Extraction from Dry Seeds for RAPD Analyses

McDonald, Miller B.; Elliot, L. J.; Sweeney, Patricia M.

doi:10.1007/978-94-011-5716-2_81

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“…A partir da maceração, as etapas seguintes para extração do DNA seguiram o protocolo descrito por McDonald et al (1994). Esse protocolo constitui na adição de 100ml do tampão de extração [Tris-HCl (pH 7,5) 200mM, NaCl 288mM, ácido etilenodiamino tetraacético (EDTA) 25mM e dodecil sulfato de sódio (SDS) 0,5%] nas amostras de sementes maceradas.…”

Section: Methodsunclassified

“…As características morfológicas, entretanto, não oferecem informações sobre os atributos genéticos relacionados à qualidade de grãos (alto conteúdo de óleo ou proteína) ou à resistência a estresses bióticos e abióticos incorporados nos cultivares. McDonald et al (1994) relataram que os resultados obtidos por meio de características físicas das sementes podem ser deficientes e, ou, imprecisos, uma vez que o estresse ambiental ou as operações pós-colheita podem mascarar ou mesmo alterar aspectos morfológicos específicos. Além disto, o uso de características morfológicas na análise de sementes geralmente demanda intensa mão-de-obra, consome muito tempo e não gera resultados precisos e confiáveis.…”

Section: Introductionunclassified

“…Para utilizar esta técnica em um programa de tecnologia de sementes, McDonald et al (1994) desenvolveram um protocolo para extração de DNA de sementes secas. Atualmente, existem relatos do uso de RAPD em teste de pureza genética em mais de 75 espécies, incluindo cereais, oleaginosas, muitas frutíferas, olerícolas e plantas ornamentais (Kelly & George, 1998).…”

Section: Introductionunclassified

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Análise da pureza genética e discriminação de cultivares de vinca (Catharanthus roseus (L.) G.Don) usando "random amplified polymorphic DNA" em DNA extraído de sementes e folhas

Menezes

McDonald

Dias³

2002

Rev. bras. sementes

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A técnica "Random Amplified Polymorphic DNA" (RAPD) surgiu como uma ferramenta útil para testar a pureza genética e a discriminação de cultivares em muitas espécies. É uma técnica simples, rápida, relativamente de baixo custo e permite o uso de DNA extraído de sementes secas, o que é muito importante em um programa de análise de sementes. O uso desta tecnologia no teste da pureza genética pode ser muito interessante para algumas espécies, como a vinca (Catharanthus roseus (L.) G.Don), pois pouco se conhece a respeito da seqüência de seu DNA. É interessante, também, pelo fato de existir grande número de "primers" comercialmente disponíveis, que podem ser prontamente utilizados para gerar dados. Essa técnica pode ser mais facilmente utilizada para gerar padrões de bandas polimórficas suficientes para discriminar genótipos diferentes. Todavia, no presente estudo, os padrões RAPD de bandas obtidas de amostras de DNA extraído de sementes de vinca em "bulk" foram não-consistentes, o mesmo ocorrendo com o uso de DNA extraído de sementes individuais de um mesmo cultivar, o que evidencia que a técnica não é aplicável para testar a pureza genética e a discriminação de cultivares de vinca. Entretanto, os padrões de bandas RAPD gerados a partir de DNA extraído de tecido foliar de plântulas foram mais reproduzíveis e poderiam ser considerados na caracterização de cultivares.

show abstract

Section: Methodsunclassified

Section: Introductionunclassified

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Análise da pureza genética e discriminação de cultivares de vinca (Catharanthus roseus (L.) G.Don) usando "random amplified polymorphic DNA" em DNA extraído de sementes e folhas

Menezes

McDonald

Dias³

2002

Rev. bras. sementes

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“…O isolamento do DNA genômico de cada genótipo de soja foi realizado utilizando-se o protocolo adaptado de McDonald et al (1994). Inicialmente, 50 mg de sementes raspadas foram transferidas para microtubos de 1,5 mL, contendo uma esfera de vidro de 3 mm de diâmetro.…”

Section: Extração Do Dna Genômico Das Sementesunclassified

Marcadores moleculares microssatélites na avaliação de sementes de soja com variação na coloração do hilo

Rabel

Vieira²,

Lana

et al. 2010

Rev. bras. sementes

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1RESUMO -Marcadores microssatélite têm sido utilizados na determinação da pureza genética em programas de melhoramento e de produção de sementes, visando garantir a qualidade genética das sementes. Objetivou-se neste trabalho demonstrar, com auxílio de marcadores moleculares microssatélites, que variações na coloração do hilo em sementes de soja, muitas vezes não constituem variação genética. Foram avaliadas sementes de soja da cultivar CD 222 que apresenta sementes com hilo preto, e de duas linhagens (CD 02RV-8444 e CD 01RV-7618), as quais apresentam sementes com hilo marrom. As sementes com variações na coloração e tonalidade do hilo encontradas em cada genótipo foram separadas visualmente em grupos. O DNA de cada semente foi extraído e analisado com marcadores microssatélites em "bulks" contendo DNA de cinco sementes. As variações encontradas na coloração do hilo da cultivar CD 222 e da linhagem CD 02RV-8444 não foram devidas à variação genética, considerando 16 locos microssatélites. Para a linhagem CD 01RV-7618, os bulks de sementes com hilo marrom pigmentado de preto (B1), com hilo marrom mais intenso (B2) e intermediário (B3), foram considerados iguais. Para esta mesma linhagem foi detectada diferença no bulk de sementes com hilo marrom menos intenso (B4), com o primer Satt 070. Duas sementes deste bulk apresentaram o mesmo padrão molecular observado para os outros bulks, no mesmo loco. As demais sementes foram consideradas misturas. A utilização de marcadores microssatélites demonstra que variações na cor ou tonalidade do hilo da soja nem sempre correspondem à variação genética.Termos para indexação: Glycine max, cor do hilo, pureza genética, SSR. MICROSATELLITE MOLECULAR MARKERS IN THE EVALUATION OF SOYBEAN SEEDS WITH VARIATION IN HILUM COLORABSTRACT -Microsatellite markers have been used in determining genetic purity in breeding programs and seed production to ensure seed genetic quality. The objective of this study was to demonstrate, with the aid of microsatellite molecular markers, that changes in the hilum color of soybean seeds are not necessarily related to genetic variation. Seeds of the CD 222 cultivar, showing a black hilum, and of two breeding lines (CD 02RV-8444 and CD 01RV-7618) showing a brown hilum, were evaluated. Seeds with color variation in the hilum of each genotype were visually 1 Submetido

show abstract

“…Genomic DNA was purified from fresh mycelium of each isolate according to a method modified from McDonald et al (1994). Briefly, mycelium was scraped from V8 agar plates with a scalpel blade.…”

Section: Deoxyribonucleic Acid Isolationmentioning

confidence: 99%

Molecular characterisation, pathogenesis and fungicide sensitivity ofPythiumspp. from table beet (Beta vulgarisvar.vulgaris) grown in the Lockyer Valley, Queensland

Scott

Martin²,

Boreel

et al. 2005

Austral. Plant Pathol.

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DNA Extraction from Dry Seeds for RAPD Analyses

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Análise da pureza genética e discriminação de cultivares de vinca (Catharanthus roseus (L.) G.Don) usando "random amplified polymorphic DNA" em DNA extraído de sementes e folhas

Análise da pureza genética e discriminação de cultivares de vinca (Catharanthus roseus (L.) G.Don) usando "random amplified polymorphic DNA" em DNA extraído de sementes e folhas

Marcadores moleculares microssatélites na avaliação de sementes de soja com variação na coloração do hilo

Molecular characterisation, pathogenesis and fungicide sensitivity ofPythiumspp. from table beet (Beta vulgarisvar.vulgaris) grown in the Lockyer Valley, Queensland

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