Diferenciación de células madre derivadas de tejido adiposo (ADSCs) en cardiomiocitos a partir de co-cultivo indirecto :proliferación celular y expresión de proteínas cardíacas

Abstract

Índice de abreviaturas Abreviatura Significado ADSCs Células madre derivadas de tejido adiposo BMSCs Células madre derivadas de médula ósea VEGF Factor de crecimiento endotelial vascular SVCs Células vasculares estromales Índice Resumen …………………………………………………………………………….. Abstract …………………………………………………………………………….. 1. Introducción ……………………………………………………………………. El tejido cardíaco en ingeniería de tejidos 1.1Marco teórico ……………………………………………………………………. Células madre y su función ¿Por qué ADSCs sobre BMSCs? Tejido adiposo: Obtención y cultivo Caracterización de ADSCs: Inmunofenotipos Cardiomiocitos: Generalidades y caracterización Inmunofenotipo cardíaco Diferenciación de ADSCs a cardiomiocitos 1.2 Proyecto General ……………………………………………………………. 1.3 Justificación …………………………………………………………………….. 1.4 Planteamiento del problema …………………………………………………… 1.5 Objetivo general ……………………………………………………………. 1.6 Objetivos específicos ……………………………………………………………. 1.7 Hipótesis …………………………………………………………………….. 2. Materiales y métodos ……………………………………………………………. 2.1 Obtención y cultivo primario de ADSCs ………………………………….. 2.2 Cultivo primario de cardiomiocitos de conejo ………………………………….. 2.3 Pruebas de diferenciación de ADSCs usando 5-Azacitidina ………………… 2.4 Pruebas de diferenciación de ADSCs por Co-Cultivo indirecto empleando medio condicionante de cardiomiocitos de conejo ………………………………………...…… 2.5 Pruebas de caracterización ……………………………………………………… Inmunotinción Citometría de flujo Ensayo MTT 3. Resultados y discusión ……………………………………………………………... 3.1 ADSCs tratadas con 5-Azacitidina ……………………………………………. 3.1.1 Inmunocitoquímica ADSC y ADSCs tratadas con 5-Azacitidina (marcaje actina) ……………………………………………………………………………… 3.1.2 Inmunocitoquímica ADSC y ADSCs tratadas con 5-Azacitidina (marcaje miosina) ……………………………………………………………………………… 3.1.3 Inmunocitoquímica ADSC y ADSCs tratadas con 5-Azacitidina (marcaje desmina) ……………………………………………………………………………… 3.1.4 Inmunofluorescencia ADSC, tejido nativo y ADSCs tratadas con 5-Azacitidina (marcaje troponina cardíaca T) …………………………………………. 3.2 ADSCs en Co-Cultivo indirecto ……………………………………………. 3.2.1 Inmunocitoquímica tejido nativo cardíaco y ADSCs en Co-Cultivo indirecto (marcaje actina) ……………………………………………………………………………… 3.2.2 Inmunocitoquímica ADSCs en Co-Cultivo indirecto y tejido nativo (marcaje miosina) ……………………………………………………………… 3.2.3 Inmunocitoquímica ADSCs en Co-Cultivo indirecto y tejido nativo (marcaje desmina) ……………………………………………………………… 3.2.4 Inmunofluorescencia ADSCs en Co-Cultivo indirecto. Tejido nativo y ADSCs en Co-Cultivo indirecto (marcaje Troponina cardíaca T) ………………………………………………………………………………. 3.3 Citometría de flujo para marcadores cardíacos ……………………………………. 3.4 Resumen de expresión de marcadores de superficie ………………..…....... 3.5 Viabilidad celular de grupos experimentales ……………………………………. 3.6 Binucleación ………………………………………………………………………. 3.6.1 ADSCs tratadas con 5-Azacitidina ……………………………………. 3.6.2 ADSCS tratadas en Co-Cultivo indirecto …………………………… 4. Conclusiones ……………………………………………………………………… Bibliografía ……………………………………………………………………… Anexo ………………………………………...