Development of a highly sensitive enzyme-linked immunosorbent assay for atrazine Performance evaluation by flow injection immunoassay

Gascón, Jordi; Oubiña, Anna; Ballesteros, Berta; Barceló, Damià; Camps, Francisco; Marco, M.‐Pilar; Martinez, Miguel A.; Morais, Sergi; Puchades, Rosa; Maquieira, Ángel

doi:10.1016/s0003-2670(97)00269-9

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“…It has been reported from other laboratories [19][20][21][22] that, on a competitive ELISA, the time given to the immunoreagents to interact, may have a direct effect on the sensitivity of the immunoassay. For this reason, we varied the length of competitive step from 15 to 120 min for assessing the effect of incubation time on the assay performance (IC 50 , RLU max and RLU max /IC 50 ).…”

Section: Effect Of Incubation Timementioning

confidence: 99%

Comparison and development of two different solid phase chemiluminescence ELISA for the determination of albumin in urine

Zhao

Lin

2005

Analytica Chimica Acta

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Two chemiluminescence enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) methods based on avidin-biotin system and Fluorescein-isothiocyanate (FITC)-anti-FITC system as two different solid phase for the determination of albumin in urine were optimized, characterized and compared. Avidin or anti-FITC antibody was coated in the microplates to provide a universal solid phase which improved the variability and sensitivity. Alkaline phosphatase (ALP) labeled albumin and albumin from standard or patient samples compete for biotinylated-antibody or FITC labeled antibody binding sites. Enzyme activity in the bound fraction was detected with the chemiluminescence substrate 4-methoxy-4-(3-phosphatephenyl)-spiro-(1,2-dioxetane-3,2 -adamantane) (AMPPD). The influence of several physico-chemical parameters, such as incubation time, detergent concentration and solid phase conditions were also studied. For the two solid phase, both the linear range and the limit of detection of albumin were 0.15-15 and 0.089 g/mL, compared with the commercially ELISA kit, a good correlation were obtained. Moreover, three different solid phases include avidin-biotin system, FITC-anti-FITC system and the anti-albumin Ab directly coated the microtitre plates were compared mainly from the cost and precision, the results showed: (1) when the avidin-biotin system as solid phase, the amounts of the antibody used was only the 1/10 than those of the anti-FITC antibody as solid phase and antibody directly coated the microtiter plates; (2) the C.V. of these two solid-phase CL ELISA methods were lower than that of antibody directly coated solid phase.

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Section: Effect Of Incubation Timementioning

confidence: 99%

Comparison and development of two different solid phase chemiluminescence ELISA for the determination of albumin in urine

Zhao

Lin

2005

Analytica Chimica Acta

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“…The pH of the sample matrix is one of the numerous factors that may affect the sensitivity of the assay detection system. In general, immunoassay is much more sensitive to acidic than to basic conditions; the maximum interaction is obtained at pH values between 7.5 and 9.0 [15]. A pH value beyond this range normally leads to a decrease in signal intensity.…”

Section: Immunobinding and Elution/ Regenerating Conditionsmentioning

confidence: 99%

“…Thus, Gasacon et al [15] described a flow-injection competitive immunoanalysis system using fluorimetric detection for the determination of atrazine in water samples. Antiatrazine antibody was immobilized based on oriented coupling onto the hydrazide-activated support (affigel-Hz) through chemical oxidation of the IgG carbohydrate moiety by periodate and covalent attachment of the generated carbonyl groups.…”

Section: Typical Examples Of Fiia For Pesticidesmentioning

confidence: 99%

Flow-injection immunoanalysis, a versatile and powerful tool for the automatic determination of environmental pollutants

Zhi

1999

Lab. Robotics Autom.

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“…Tanto o antígeno quanto o anticorpo podem ser marcados (conjugados) e as enzimas, atualmente, são os marcadores mais empregados em imunoensaios. Um dos grandes avanços em téc-nicas imunoanalíticas foi o desenvolvimento de enzima-imunoensaios como a denominada ELISA ("Enzyme Linked Immunosorbent Assays"), tendo enzima como meio alternativo de detecção 11 . A invenção da microscopia de força atômica (AFM) foi o primeiro exemplo de método de análise micrométrica e tornou possí-vel o emprego do cantilever em aplicações topográficas com alta resolução a dimensões reduzidas e não-topográficas (sensores com mecanismo de transdução mecânica) [12][13][14][15] .…”

Section: Introductionunclassified

Microscopia de força atômica aplicada em imunoensaios

Ferreira¹,

Yamanaka²

2006

Quím. Nova

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Recebido em 4/1/05; aceito em 3/5/05; publicado na web em 24/8/05 ATOMIC FORCE MICROSCOPY APPLIED TO IMMUNOASSAYS. Affinity reactions have been used for specific detection of their complementary partners and an enormous variety of enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) formats are used in research and in routine serological tests. With the advent of the atomic force microscopy (AFM) technique, the immune reactions have been monitored by these devices. In the present article we focus on applications of AFM to immunoassays. After introducing the basic concepts of AFM, a brief discussion on the monitoring of the interactions between antigens and antibodies through both topographic image and biosensor systems is presented.Keywords: atomic force microscopy; antigen-antibody; immunoassay. INTRODUÇÃONos últimos anos a construção de biossensores 1,2 tem despertado considerável interesse no monitoramento de analitos nas áreas biológica, clínica 3,4 e industrial 5 , como também no monitoramento e controle de alguns poluentes ambientais 6 . O crescente emprego de biossensores deve-se à possibilidade destes atenderem algumas exigências que os métodos clássicos de análises não conseguem, sendo as características mais relevantes: simplicidade de construção, resposta rápida, redução de custo, seletividade, sensibilidade, miniaturização, precisão, facilidade de uso e pequeno volume de amostra.Um biossensor pode ser definido como um dispositivo de detecção, contendo um componente biológico ativo (enzimas, anticorpos, antígenos, células, etc.) diretamente acoplado à superfície de um transdutor, o qual converte um sinal biológico em sinal elétrico.Com base no reconhecimento do sinal de interesse pelo detector encontram-se, por ex., os imunossensores e sensores enzimáticos. Enquanto nos biossensores com enzima são monitoradas as concentrações de substratos, produtos ou mediadores, nos imunossensores 7-9 , que são dispositivos analíticos, baseados nos princípios de imunoensaios heterogêneos e nos eventos físico-químicos, são resultantes da reação de afinidade antígeno-anticorpo (Ag-Ac).No imunoensaio, o sítio combinatório do anticorpo (Ac) ou paratopo interage especificamente com porções mais superficiais (determinantes antigênicos ou epitopos) do antígeno (Ag) ou hapteno (substância não protéica de baixo peso molecular que pode se ligar a sítios específicos de combinação de anticorpos, mas não pode, por si só, iniciar uma resposta imune), formando um complexo Ag-Ac, conforme a Equação 1. Esta interação é caracterizada por uma constante de afinidade que é função das concentrações do complexo formado, do antígeno e do anticorpo livres no meio de reação. Essa interação é mantida por forças fracas, como forças iônicas, ligações de hidrogênio, forças eletrodinâmicas (van der Waals) e hidrofóbicas, garantindo o fenômeno da especificidade antígeno-anticorpo. Também podem ocorrer reações não-específicas (reações cruzadas) de outros anticorpos que competem pela ligação com o antígeno 8,10 , como, por ex., ligação com o antígeno 8,10 .Ac ...

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Development of a highly sensitive enzyme-linked immunosorbent assay for atrazine Performance evaluation by flow injection immunoassay

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Comparison and development of two different solid phase chemiluminescence ELISA for the determination of albumin in urine

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