Um método simples, isocrático, de HPLC foi desenvolvido para quantificação simultânea de dois triterpenos bioativos, ácido ursólico e lactona do ácido ursólico em folhas de E. tereticornis. As amostras foram analisadas em coluna RP-18 (4,6 × 250 mm, 5 µm) com metanol e água acidificada a pH 3,5 com TFA (88:12) a 210 nm. O método foi validado e aplicado para a quantificação simultânea dos triterpenos individuais em extrato de E. tereticornis. As curvas de calibração foram lineares no intervalo de concentração de 0,05 a 0,3 mg mL -1 (r = 0,999 e 0,998, respectivamente). Os limites de detecção e quantificação foram 0,190 e 0,644 µg para ácido ursólico e 0,176 e 0,587 µg para lactona do ácido ursólico, enquanto as porcentagens de recuperação foram 97,32 e 96,23% para ácido ursólico e lactona do ácido ursólico, respectivamente. Este é o primeiro relato sobre o método HPLC de lactona do ácido ursólico com alta precisão e exatidão.A simple isocratic HPLC method has been developed for the simultaneous quantification of two bioactive triterpenes, ursolic acid and ursolic acid lactone in E. tereticornis leaves. Samples were analyzed on RP-18 (4.6 × 250 mm, 5 µm) column with methanol and water acidified to pH 3.5 with TFA (88:12) at 210 nm. The method was validated and applied for the simultaneous quantification of the individual triterpenes in E. tereticornis extract. The calibration curves were linear over a concentration range of 0.05-0.3 mg mL -1 (r = 0.999 and 0.998, respectively). The limits of detection and quantification were 0.190 and 0.644 µg for ursolic acid, and 0.176 and 0.587 µg for ursolic acid lactone, while the percentage recoveries were 97.32 and 96.23% for ursolic acid and ursolic acid lactone, respectively. This is the first report on the HPLC method of ursolic acid lactone with high precision and accuracy.