Determination of quercetin aglycone in Flos Sophorae Immaturus extract of (Sophora japonica L.) by High Performance Liquid Chromatography

Abstract

The research has established a method to directly extract and determine free quercetin (aglycone form) from Flos Sophorae Immaturus methanol extract by using a simple HPLC method. Conducting experiment with system HPLC Agilent 1260 Infinity, reverse column ZORBAX SB-C18 (temperature 25oC), flow rate 0.5 ml/min, average pressure 30 and 35 bar, and diode array detector (DAD), we found that these parameters is suitbale: λmax = 370 nm, injection volume is 20 µl, analysis time 16 minutes, mobile phase (% volume) consists of methanol (15%), acetonitril (20%) and solvent C (65%, contains 1% acetic acid, methanol, acetonitril and H2O, 40%, 15% and 45% respectively. After using a combination of irocratic elution and standard addition, retention time of free quercetin in Flos Sophorae Immaturus methanol extract has found to be 8.84 ± 0,05 (min). Relative standard deviation (RSD) of retetion time, peak area and peak height have been less than 1%, this results have indicated that the proposed method has fullfilled the validation parameters such as selectivity/specitifity, precision/repeatability. This study provided useful information for screening activity of quercetin by using different methods.

Study of Ultrasound-assisted Acid Hydrolysis to Obtain Quercetin and their Antioxidant Activities from some Plants

“…Phương pháp HPLC được áp dụng với thể tích mẫu (10 µl), tốc độ dòng (1,0 ml/phút) [5]. Một số điều kiện sắc ký được tiếp cận theo phương pháp của Hoàng và cộng sự [5], sử dụng cột ZORBAX SB-C18 (nhiệt độ 25 o C), bước sóng 370 nm. Hệ pha động của HPLC gồm methanol (15%), acetonitril (20%) và hỗn hợp C (65%).…”

“…3.1. Đánh giá độ ổn định của các thông số trong sắc ký HPLCNghiên cứu của Hoàng và cộng sự đã xác định được quercetin trong dịch chiết methanol nụ hoa hòe bằng phương pháp HPLC[5]. Trong nghiên cứu này, mẫu phân tích là dịch thủy phân có hàm lượng quercetin lớn hơn nhiều lần với thay đổi về pH, thành phần hóa học so với mẫu dịch chiết[1].…”

“…Do vậy, chúng tôi đã nghiên cứu để tối ưu thể tích tiêm mẫu và tốc độ dòng của điều kiện sắc ký HPLC nhằm tăng hiệu quả phân tách với thời gian lưu của đỉnh quercetin là ngắn nhất.Kết quả thu được cho thấy với thể tích tiêm mẫu (10µl), tốc độ dòng (1,0 ml/phút) quercetin chuẩn có thời gian lưu hơn 8 phút trong nghiên cứu của Hoàng và cộng sự đã giảm xuống dưới 2 phút. Độ lệch chuẩn tương đối (RSD) của các thông số sắc ký đều dưới 2%, RSD của thời gian lưu dưới 1% (bảng 1 và hình 1) là đạt yêu cầu[5].Theo bảng 1, phương pháp HPLC được thiết lập, có độ chính xác trên 99%, giới hạn phát hiện 0,1 μg/ml và giới hạn định lượng là 0,3 μg/ml. Phương trình biểu diễn mối liên hệ giữa nồng độ và diện tích píc có độ tương quan tuyến tính khá chặt (R 2 = 0,9994).…”