Determination of drugs by direct injection of plasma into a biocompatible extraction column based on a protein-entrapped hydrophobic phase

Hermansson, Jörgen; Grahn, Anders

doi:10.1016/0021-9673(94)85105-0

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“…Colunas RAM proteína-imobilizada preparadas com BSA 6 , avidina 22 e AGP (α-1-glicoproteína) 23 têm sido utilizadas com sucesso na análise de xenobióticos em leite 18,24 , plasma 20,25,26 , saliva 27 e tecidos biológicos 28,29 . Como a albumina sérica bovina se encontra disponível comercialmente a um custo relativamente baixo e suas propriedades físico-químicas permitem a utilização em várias condições cromatográficas no modo reverso de eluição, o que é uma vantagem quando se trabalha com injeção direta de amostras biológicas, esta proteína foi usada no preparo das colunas RAM avaliadas.…”

Section: Resultsunclassified

Desenvolvimento de colunas cromatográficas de meios de acesso restrito proteína-imobilizada e suas avaliações para análise de fármacos com injeção direta de plasma humano

2006

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Recebido em 6/1/05; aceito em 25/4/05; publicado na web em 24/8/05 DEVELOPMENT OF RESTRICTED-ACCESS MEDIA CHROMATOGRAPHIC COLUMNS PROTEIN-IMMOBILIZED AND THEIR EVALUATION FOR THE ANALYSIS OF DRUGS BY DIRECT INJECTION OF HUMAN PLASMA.A series of bovine serum albumin-immobilized supports have been prepared and used as restricted access media (RAM) columns. Restricted-access supports combine size-exclusion of proteins and other high-molar-mass matrix components with the simultaneous enrichment of low-molar mass analytes. These characteristics were chromatographically evaluated for the columns. The RAM-BSA (Bovine Serum Albumin) columns showed excellent performance for exclusion of human plasma protein with good retention capacity for a series of acidic, basic, and neutral drugs.Keywords: RAM column; direct injection; plasma samples. INTRODUÇÃOA Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) é uma técnica amplamente utilizada na análise de xenobióticos em fluidos biológicos. No entanto, amostras de matrizes biológicas não devem ser diretamente injetadas nas fases cromatográficas, uma vez que as proteínas presentes nestes tipos de matrizes (soro, plasma, urina, leite, etc) provocam rápido entupimento da coluna e perda da eficiência cromatográfica, devido à sua adsorção acumulativa no suporte. Para evitar a rápida deterioração das colunas, antes da análise cromatográfica é necessário realizar um pré-tratamento nas amostras biológicas. Este pré-tratamento permite a remoção das proteínas e dos interferentes endógenos e/ou a pré-concentração dos analitos, proporcionando um aumento na seletividade e sensitividade do método 1-3 . Entre as técnicas mais comumente utilizadas para extração e/ ou pré-concentração de substâncias presentes em fluidos biológi-cos destacam-se extração líquido-líquido, extração em fase sólida, extração com fluido supercrítico e extração com membranas sóli-das ou líquidas.Atualmente, devido ao grande número de amostras usualmente manuseadas nas análises, o procedimento de preparo das mesmas deve ser rápido e conveniente, com perdas mínimas dos analitos e baixo custo de análise. Neste sentido, técnicas de injeção direta de amostra têm sido exploradas uma vez que eliminam os erros humanos de manipulação, minimizam as perdas dos analitos, evitam o manuseio de amostras perigosas ou infecciosas e aumentam, significativamente, o número de análises por tempo 4,5 . Dentre as técnicas de injeção direta, as que utilizam fases do tipo RAM ("Restricted-Access Media") têm se destacado 4,5 . Estas fases estacionárias combinam os princípios da Cromatografia de Exclusão e da Cromatografia de Fase Reversa, uma vez que sua superfície hidrofílica impede a adsorção de macromoléculas da matriz biológica na fase estacionária e suas propriedades hidrofóbicas são responsáveis pela retenção das micromoléculas (Figura 1) [6][7][8][9][10][11] .

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Section: Resultsunclassified

Desenvolvimento de colunas cromatográficas de meios de acesso restrito proteína-imobilizada e suas avaliações para análise de fármacos com injeção direta de plasma humano

2006

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“…4). This extraction support developed for the direct injection of biological fluids, was introduced by Hermansson and Grahn in 1994 [105] and was commercialized under the trade name of BioTrap [106]. This material is constituted of porous silica particles with the outer surface covered with the human plasma protein; ␣ 1 -acid glycoprotein (AGP).…”

Section: Protein-coated Silicamentioning

confidence: 99%

Restricted access materials and large particle supports for on-line sample preparation: an attractive approach for biological fluids analysis

Souverain

Rudaz

Veuthey

2004

Journal of Chromatography B

247

124

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“…A low recovery from the work-up procedure can influence the concentration ratio between the enantiomers, so that the enantiomer with the highest affinity to plasma proteins gives the lowest recovery. This has also been pointed out by Hermansson et al [6]. Recovery was also influenced by the sample matrix.…”

Section: Discussionmentioning

confidence: 64%

Liquid chromatographic determination of fluvastatin and its enantiomers in blood plasma by automated solid-phase extraction

Toreson

Eriksson

1997

Chromatographia

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SummaryLiquid chromatographic methods for determination of fluvastatin, as racemate and as separated enantiomers, are described. Fluvastatin is an anticholesterolemic agent that inhibits the rate limiting enzyme in cholesterol biosynthesis. The sample clean-up was fully automated, using solid-phase extraction. Plasma samples were injected onto disposable C2 cartridges, connected on-line with the analytical column. After washing, the analytes were eluted and transferred to a C8-analytical column for racemate determination or to a Chiralcel OD-R column for enantiomer separation. Analytes were monitored by fluorescence detection after post-column exposure of the eluate to UV light, which enhanced the sensitivity 20-fold for fluvastatin and 10-fold for the enantiomers. Absolute recoveries were > 90 % both for the racemate and enantiomers. Limits of quantitation were 0.5 nM for the racemate and 1 nM for enantiomers, using 200 gL plasma sample.

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Determination of drugs by direct injection of plasma into a biocompatible extraction column based on a protein-entrapped hydrophobic phase

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Desenvolvimento de colunas cromatográficas de meios de acesso restrito proteína-imobilizada e suas avaliações para análise de fármacos com injeção direta de plasma humano

Desenvolvimento de colunas cromatográficas de meios de acesso restrito proteína-imobilizada e suas avaliações para análise de fármacos com injeção direta de plasma humano

Restricted access materials and large particle supports for on-line sample preparation: an attractive approach for biological fluids analysis

Liquid chromatographic determination of fluvastatin and its enantiomers in blood plasma by automated solid-phase extraction

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