Determinación y cuantificación de subpoblaciones de linfocitos T y células natural killer en sangre periférica de individuos sanos por citometría de flujo

Abstract

Introducción: La determinación de las diferentes subpoblaciones de los linfocitos T en las diversas patologías y el monitoreo postratamiento ayuda a que el médico tome decisiones terapéuticas teniendo como referencia la cinética de los linfocitos T localizados en sangre periférica. Métodos: Se realizó la estandarización de un perfil de moléculas de superficie para la caracterización de subpoblaciones de linfocitos T: naϊve, activados y de memoria, así como las células natural killer o asesinas naturales (CD3− CD56+) en sangre periférica de individuos clínicamente sanos. Resultados: Se identificaron las subpoblaciones de linfocitos: naïve (CD3+, CD4+ o CD8+, CD45RA+, CD62L+, CCR7+), activados (CD3+, CD4+ o CD8+, CD45RA+ o CD45RO+, CD69+ y/o CRTAM+), efectores (CD3+, CD4+ o CD8+, CD45RA+, CD62L−, CCR7−), de memoria central (CD3+, CD4+ o CD8+, CD45RO+, CD62L+, CCR7+) y de memoria efectora (CD3+, CD4+ o CD8+, CD45RO+, CD62L−, CCR7−) en las poblaciones de linfocitos T CD4+ y CD8+. Se integraron los datos obtenidos con estadística descriptiva (valores mínimos, valores máximos, media, mediana). Conclusiones: Este panel será de gran utilidad para monitorear pacientes en quienes se requiera valorar el estado inmunológico desde el punto de vista celular. Particularmente, puede apoyar en el seguimiento de los pacientes en los que se requiera evaluar la reconstitución inmunológica (componente celular de estirpe T).

Determinación del intervalo de referencia para subpoblaciones linfocitarias CD3+, CD4+ y CD8+ y el índice CD4+/CD8+ en la población chilena adulta

“…El protocolo EP28-A3c recomienda la prueba de Dixon-Reed para descartar valores atípicos, haciendo énfasis en retener todos los valores, a menos que se sepa que las observaciones atípicas son aberrantes (por ejemplo, debido a un error de análisis o falla en controles pre-analíticos). Esto, porque los límites de referencia estimados no paramétricamente para muestras mayores de 120 observaciones no se modifican si se elimina un valor extremo, permitiendo establecer límites de referencia con un intervalo de confianza de 90% 10 . Aunque este método no requiere una suposición específica sobre la forma matemática que sigue nuestro conjunto de mediciones, hemos comprobado el tipo de distribución a fin de realizar análisis por métodos estadísticos tradicionales para describir la tendencia que siguen los grupos de muestras.…”

“…Los InR de las SPL no han sido estudiados en la población adulta sana de Chile, haciendo forzosa la utilización de valores extraídos de publicaciones internacionales y que fueron obtenidos con la tecnología de hace más de dos décadas 2 . Este estancamiento, junto con el aumento en los casos de VIH+ en los últimos años, hace urgente la necesidad de establecer InR para SPL de acuerdo a parámetros obtenidos de la población chilena, mediante la tecnología vigente y utilizando criterios estandarizados por el Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) (10). De este modo se reducirá la variabilidad analítica y se logrará un mejor monitoreo de los pacientes VIH+ 1,3,4,7 .…”

“…Todos los recuentos se realizaron en plataforma simple y los datos obtenidos de la medición fueron analizados mediante el software EP Evaluator R. Análisis estadísticos adicionales fueron realizados utilizando Minitab 18 (Minitab Inc, USA) y SPSS v19 (SPSS Statistics, USA). Desde la fase preanalítica hasta los análisis estadísticos fueron realizados siguiendo el protocolo EP28-A3c del Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) 10 . De acuerdo a este protocolo, los datos atípicos fueron buscados mediante la regla de Dixon-Reed y los límites de referencia establecidos en los fractiles 0,025 y fa0,975 fueron obtenidos utilizando el método propuesto por Solberg HE, con un intervalo de confianza de 90%.…”