Detection of Mycoplasma pneumoniae in clinical samples from pediatric patients by polymerase chain reaction

Abstract

The polymerase chain reaction (PCR) technique was used to detect Mycoplasma pneumoniae DNA in clinical samples (nasopharyngeal aspirations or bronchoalveolar lavages) obtained from 100 children, 1 month to 16 years old. PCR allowed the detection of M. pneumoniae DNA from 20 out of the 100 patients studied. In 16 cases, PCR positivity was associated with acute respiratory symptomatology. For five PCR-positive patients, a positive culture or a serological response evidenced acute M. pneumoniae infections. A lack of antibody response was observed particularly with immunocompromised children and infants less than 12 months old. The amount of M. pneumoniae DNA in the PCR was estimated in a semiquantitative way by comparison of its hybridization signal with those obtained for 100, 10, and 1 color-changing unit (CCU) of the M. pneumoniae FH strain. Small amounts (<102 CCU/ml) of M. pneumoniae were found in samples from asymptomatic patients, while larger amounts (.102 to .104 CCU/ml) were found for 8 out of 10 patients with acute pneumonia.

Infections à Mycoplasma pneumoniae : étude rétrospective en Basse-Normandie de 1997 à 2005. Épidémiologie –– Place de la sérologie et de la PCR pour le diagnostic

“…La mise en évidence de la bactérie par les méthodes sensibles et spécifiques de PCR a amélioré les performances diagnostiques en termes de rapidité (délai de réponse 24 heures) et de précocité (dès le début des signes cliniques) [27,32,33]. Cependant, l'existence de portage sain au niveau du tractus respiratoire [24], la présence d'inhibiteurs d'amplification dans certains prélèvements, la variabilité de la richesse cellulaire du prélèvement peuvent influencer fortement l'interprétation des résultats PCR.…”

“…Plusieurs études font état de l'existence de portage sain de Mpn au niveau du tractus respiratoire. Il apparaît donc difficile de le différencier d'une infection active par une PCR conventionnelle [12,18,32,33]. Dorigo-Zetsma et al, en utilisant une technique PCR semi-quantitative, montrent une relation significative entre la charge bactérienne et la sévérité de l'infection chez des patients hospitalisés, non hospitalisés et contacts asymptomatiques [38].…”

“…Parmi [18,25,27,29,31,33,35]. Les discordances -sérologie positive/PCR négative -peuvent s'expliquer par l'existence d'une charge bactérienne faible, en dessous du seuil de détection, du fait d'un prélèvement retardé ou plus probablement d'un prélèvement défectueux.…”

“…Les discordances -sérologie positive/PCR négative -peuvent s'expliquer par l'existence d'une charge bactérienne faible, en dessous du seuil de détection, du fait d'un prélèvement retardé ou plus probablement d'un prélèvement défectueux. L'absence de contrôle interne dans notre PCR ne permet pas d'éliminer la présence d'inhibiteurs de la réaction PCR [27,33]. On ne peut également exclure un prélèvement pauvre en cellules (environ 8 à 10 % des aspirations nasales observées quotidiennement en immunofluorescence sont ininterprétables par absence de cellules nasales).…”

“…Dans quatre cas, l'absence de réponse immune peut s'expliquer par l'existence d'un seul prélèvement sérologique à un stade précoce de l'infection. Pour le cinquième cas, l'apparition fugace des IgM sans apparition des IgG à un mois permet d'envisager une réponse immune retardée ou déficiente [33]. Toutefois, l'index PCR faible observé chez cet adulte --PCR positive/sérologie négative -ne permet pas d'exclure un faux positif de la PCR ou une faible charge bactérienne témoin d'un portage sain, bien qu'aucune autre étiologie bactérienne et virale n'ait été retrouvée pour ce patient [12,35,41].…”