Detection of Human T-Lymphotropic Virus Type I (HTLV-I) Infection during Coculture of HTLV-I Infected and Uninfected Cells Using Inverse Long PCR

Abstract

Objective: Identifying the new integration of human T-lymphotropic virus type I (HTLV-I) proviral genome into initially uninfected cells after cocultivation with HTLV-I infected cells is important for clarifying the process of infection. We examined the usefulness of inverse long polymerase chain reaction (IL-PCR) for this purpose. Method: An experimental system using IL-PCR was applied to detect the transmission of HTLV-I between irradiated HTLV-I infected cells (HUT102) and uninfected targed cells (MOLT4, K562) after short-term and long-term coculturing. Results: In every coculture experiment with irradiated HTLV-I infected cells and uninfected cells, the new integration of HTLV-I was easily identified by IL-PCR. Oligoclonal proliferation of HTLV-I-positive cells was shown among MOLT4 cells even 4 months after the cocultivation; however, no evidence of viral replication was observed by indirect immunofluorescence assay or reverse transcription-PCR. We also used IL-PCR to assess the inhibitory effects of azidothymidine, anti-gp46, anti-vascular cell adhesion molecule-1 and anti-heat shock cognate protein 70 (HSC70) monoclonal antibody. Integration of HTLV-I provirus was inhibited in all of these cases except for anti-HSC70. Conclusion: This experimental method enabled the detection of cell-to-cell transmission of HTLV-I directly and was useful for studying the mechanisms of cell-associated HTLV-I infection.

Epidemiología y bioinformática en el estudio de la Leucemia Linfoma de Células T del Adulto asociada a la infección con VLHT-1

“…Adicionalmente, el gen también podría involucrarse en la transmisión viral célula a célula por formación de sinsitios (32). Así mismo la presencia de otros genes adyacentes a provirus como el ARL15 ("ADP-ribosylation factor-like 5") es importante pues liga GTP que activa la expresión de las proteínas Ras (33); el gen de Sintenina (SDCBP), que codifica para proteínas que participan en los procesos de transmisión de señales a nivel de citoesqueleto (32).…”

“…Adicionalmente, el gen también podría involucrarse en la transmisión viral célula a célula por formación de sinsitios (32). Así mismo la presencia de otros genes adyacentes a provirus como el ARL15 ("ADP-ribosylation factor-like 5") es importante pues liga GTP que activa la expresión de las proteínas Ras (33); el gen de Sintenina (SDCBP), que codifica para proteínas que participan en los procesos de transmisión de señales a nivel de citoesqueleto (32). El factor 8 regulador del interferón (IRF-8), el cual pertenece a un grupo de proteínas reguladoras de la respuesta inmune (34,35); el gen USP25 relacionado no solo con la degradación de proteínas sino también con procesos de control celular, tráfico de proteínas y remodelación de la cromatina, entre otros (36); todos ellos estarían participando de redes de expresión de genes cruciales para el control de procesos asociados con la leukomogènesis y de descontrol del ciclo celular que se asocian con LLCTA.…”

Multiple Integrations of Human T-Lymphotropic Virus Type 1 Proviruses in the Engrafted Cells from the Asymptomatic Carriers in NOD/SCID/γc^null Mice

“…The inhibition of HTLV-1 infection to the offspring by the sera of HTLV-1 carriers was reported in the rabbit model [19] . The addition of antibody to HTLV-1, anti-gp-46, to the coculture of HTLV-1-infected and -uninfected cells also inhibits new infection [20] . These data suggest that immune responses to HTLV-1 may prevent active infection between noninfected cells and infected cells in carriers.…”