Detection of endoproteinases in polyacrylamide gels

Petersen, Gary R.; Etten, James L. Van

doi:10.1002/elps.1150040613

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“…Investigation for protease activity (38,45) of AgSp was made by hydrolysis of 1% V N casein incorporated into 200 pm thick agarose gel. Whatman paper disks, 1 cm in diameter, were applied onto the gel.…”

Section: Analysis Of the A S P 2-anti Sp 2 Antisetum Systemmentioning

confidence: 99%

Purification and Characterization of Deep Candidosis Related Antigens/Reindarstellung und Charakterisierung von Antigenen mit Beziehung zu tiefen Candidosen

Benbouzid¹,

Sabbagh

Cloppet

et al. 1986

Mycoses

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Summary: Deep‐candidosis related antigens were purified by means of bioaffinity chromatography on sepharose anti‐Candida rabbit IgG immunosorbents. Specific immunoglobulins obtained from rabbits with chronic systemic candidosis were fixed on CNBr‐Sepharose 4B and constituted our first affinity chromatography column. Rabbits were immunized with the corresponding purified antigens and a second affinity chromatography column was constituted with these hyperimmune anti‐Candida rabbit IgG. The corresponding purified antigens showed 20 precipitation peaks in crossed Immunoelectrophoresis. Enzyme activities using API‐ZYM and a proteinase were also detected in the purified antigens. Acute and chronic infections in mice and rabbits were done and confirmed previous works. Possible applications of these purified antigens to specific serodiagnosis of systemic candidosis are being evaluated. Zusammenfassung: Antigene mit Beziehung zu tiefen Candidosen wurden mit Hilfe der Bioaffinitätschromatographie auf Sepharose unter Verwendung von anti‐Candida Kaninchen‐IgG‐Immunsorbentien gereinigt. Spezifische Immunglobuline von Kaninchen mit chronischer systemischer Candidose wurden an CNBr‐Sepharose 4B fixiert und für die erste Säule bei der Affinitäts‐Chromatographie verwendet. Kaninchen wurden sodann mit den gereinigten Antigenen immunisiert und eine zweite Affinitäts‐Chromatographiesäule wurde mit dem so gewonnenen anti‐Candida‐Kaninchen‐Hyperinunun‐IgG beschickt. Die hiermit gewonnenen und gereinigten Antigene zeigten in der zweidimensionalen Immunelektrophorese 20 Präzipitationsgipfel. Einige Enzymaktivitäten wurden mit Hilfe von API‐ZYM und zusätzlich wurde eine Proteinase ebenfalls unter den gereinigten Antigenen entdeckt. An akuten und chronischen Candida‐Infektionen von Mäusen und Kaninchen konnten die Ergebnisse bestätigt werden. Die mögliche An wendbarkeit der gereinigten Antigene für eine spezifische Serodiagnostik systemischer Candidosen wird diskutiert.

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Section: Analysis Of the A S P 2-anti Sp 2 Antisetum Systemmentioning

confidence: 99%

Purification and Characterization of Deep Candidosis Related Antigens/Reindarstellung und Charakterisierung von Antigenen mit Beziehung zu tiefen Candidosen

Benbouzid¹,

Sabbagh

Cloppet

et al. 1986

Mycoses

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Identification of protease isozymes after analytical isoelectric focusing using fluorogenic substrates impregnated into cellulose membranes.

Smith¹

1984

J Histochem Cytochem.

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A technique to characterize active isozymes of proteases is described. After isoelectric focusing in an ultrathin gel, a cellulose diacetate or hydrate membrane previously impregnated with media containing a fluorogenic substrate is applied to the surface of the gel. Low-molecular-weight peptide inhibitors can also be added to the membrane to enhance specificity. The technique shows excellent reproducibility, specificity, and sensitivity, and has promise for the study of isozymes of proteases in tissues and body fluids in normal and pathological states.

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Detection of endoproteinases in polyacrylamide gels

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Purification and Characterization of Deep Candidosis Related Antigens/Reindarstellung und Charakterisierung von Antigenen mit Beziehung zu tiefen Candidosen

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Identification of protease isozymes after analytical isoelectric focusing using fluorogenic substrates impregnated into cellulose membranes.

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