Detecção simultânea de Coronavírus bovino e Rotavírus do grupo A em amostras fecais de bovinos utilizando uma multiplex hemi-nested RT-PCR

Abstract

pela brilhante orientação, pela confiança em meu trabalho e pelos conselhos. Ao prof. Dr Silvio Arruda Vasconcellos e profa. Dra Solange Maria Gennari pela dedicação com o programa de pós-graduação do VPS. Ao prof. Dr. Rodrigo Martins Soares pelas conversas e pelas valiosas sugestões. Ao prof. Leonardo José Richtzenhain, pela oportunidade e aprendizado, desde a graduação. Ao prof José Antônio Jerez, pelas conversas e simpatia. Aos professores Drs. Fernando Ferreira, José Soares, Evelise Telles e Ricardo Dias pelas conversas e pelos bons momentos. Aos demais professores do VPS. A Sibele Pinheiro de Souza, amiga e colaboradora, pela amizade e por toda a ajuda neste trabalho. A Iracema Nunes de Barros, sempre prestativa e estudiosa, pelas suas piadinhas. Ao Márcio Pinotti Guirao, companheiro desde a época de estágio, pela amizade e pela sua simpatia. A Thaísa Lucas Sandri pelas conversas e pela amizade. A Giselle Ayres Razera, pela sua amizade e atenção.

Um enfoque multigênico para a genealogia comparada de Betacoronavirus em bovinos e equinos

“…Portanto, observando-se que apenas em concentração de DNA acima do padrão utilizado foram obtidas amplificações, pode-se considerar que, de fato, o baixo título viral nas amostras fecais associado ao longo tempo de conservação das amostras a -20ºC e a conseqüente degeneração do RNA viral foram responsáveis pelo baixo sucesso na obtenção de amplificados para o gene HE. Por sua vez, nota-se que, em concentrações de DNA superiores (10 µL / reação), não houve amplificação, provavelmente em função de total degradação do RNA ou excesso de DNA (ASANO, 2009).…”

Desenvolvimento de um método de PCR em tempo real para o diagnóstico de rotavírus suíno do grupo A

“…Porém, como todo teste sorológico está diretamente relacionado com a qualidade dos anticorpos empregados, podendo ocorrer perda de especificidade decorrente de reações inespecíficas e presença de inibidores nas fezes. Outra limitação reside na dificuldade de desenvolvimento de anticorpos específicos para diagnóstico ou caracterização do vírus, com rara disponibilidade comercial(JURE;MORSE;STARK, 1988;MÉDICI, 2007;ASANO, 2009).Já a RT-PCR não exige viabilidade da estrutura proteica viral, pois a detecção é realizada por meio da amplificação do genoma(MÉDICI, 2007), utilizada tanto para a detecção do agente como também para classificá-los genotipicamente(MATTHIJNSSENS et al, 2011). Esta técnica é altamente sensível e específica, mas que por outro lado, uma das suas dificuldades é a padronização detalhada da reação(HOORFAR et al, 2004), além de poder apresentar resultados falso-negativos, decorrente da presença de substâncias inibitórias em amostras fecais.…”