Desenvolvimento e validação de metodologia para radiofármacos de Tecnécio- 99m empregando cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE)

Abstract

Radiopharmaceuticals are compounds, with no pharmacological action, which have a radioisotope in their composition and are used in Nuclear Medicine for diagnosis and therapy of several diseases. In this work, the development and validation of an analytical method for 99m Tc-HSA, 99m Tc-EC, 99m Tc-ECD and 99m Tc-Sestamibi radiopharmaceuticals and for some raw materials were carried out by high performance liquid chromatography (HPLC). The analyses were performed in a Shimadzu HPLC equipment, LC-20AT Prominence model. Some impurities were identified by the addition of a reference standard substance. Validation of the method was carried out according to the criteria defined in RE n. 899/2003 of the National Sanitary Agency (ANVISA). The results for robustness of the method showed that it is necessary to control flow rate conditions, sample volume, pH of the mobile phase and temperature of the oven. The analytical curves were linear in the concentration ranges, with linear correlation coefficients (r 2) above 0.9995. The results for precision, accuracy and recovery showed values in the range of 0.07-4.78%, 95.38-106.50% and 94.40-100.95%, respectively. The detection limits (DL) and quantification limits (QL) varied from 0.27 to 5.77 µg mL-1 and 0.90 to 19.23 µg mL-1 , respectively. The values for HAS, EC, ECD and MIBI in the lyophilized reagents (LR) were 8.95; 0.485; 0.986 and 0.974 mg L-1 , respectively. The mean radiochemical purity for 99m Tc-HSA, 99m Tc-EC, 99m Tc-ECD and 99m Tc-Sestamibi was (97.28 ± 0.09)%, (98.96 ± 0.03)%, (98.96 ± 0.03)% and (98.07 ± 0.01)%, respectively. All the parameters recommended by ANVISA were evaluated and the results are below the established limits. Página FIGURA-Gerador de 99 Mo/ 99m Tc. 6 FIGURA 2-Diagrama do decaimento do 99 Mo a 99m Tc. 6 FIGURA 3-Esquema das reações para obtenção dos radiofármacos de 99m Tc 8 FIGURA 4-Estrutura quaternária do SAH com os resíduos de cisteína e triptofano em destaque. 9 FIGURA 5-Esquema simplificado das etapas de síntese do EC. (I) ácido Ltiazolidino-4-carboxílico, (II) EC. FIGURA 6-Estrutura de L,L-EC-99m Tc. FIGURA 7-Estrutura molecular de L,L-ECD-99m Tc. FIGURA 8-(A) Estrutura molecular do MIBI e (B) Estrutura molecular do Sestamibi-99m Tc FIGURA 9-Esquema simplificado de um sistema cromatográfico para CLAE. FIGURA 10-Cromatografia de exclusão molecular. (A) Aplicação da amostra. (B) Interação da amostra com os poros da fase estacionária. (C) Separação das moléculas da amostra de acordo a massa molecular. FIGURA 11-Princípio da cromatografia de par de íons. O pareador iônico adicionado à fase móvel se liga à fase estacionária apolar. Os grupos sulfonatos negativos ficam expostos na fase estacionária e interagem com os íons da amostra. FIGURA 12-Princípio da cromatografia planar. (A) aplicação da amostra; (B) inserção da placa em uma cuba com a fase móvel e (C) separação dos analitos. FIGURA 13-Fluxograma das fases envolvidas no processo de validação de um método analítico. FIGURA 14-Fluxograma das fases de marcação dos RL com 99m Tc.

Determinação multielementar de elementos traços em radiofármacos produzidos na Diretoria de Radiofarmácia por espectrometria de emissão por plasma

“…Nos procedimentos "in vitro" é retirada uma amostra biológica do paciente, que depois é marcada com uma substância radioativa numa técnica conhecida como radioimunoensaio (1) . Na técnica "in vivo", o radiofármaco pode atingir o órgão alvo através da perfusão sanguínea ou podem ser direcionados por moléculas biologicamente ativas, com anticorpos específicos (1,7,15) .…”

Estudo das impurezas radioativas gama emissoras presentes nos radiofármacos produzidos no IPEN-CNEN/SP

“…A implantação e a aplicação de um sistema de qualidade pelo fabricante são essenciais, uma vez que, os radiofármacos que possuem meia vida curta (cerca de minutos ou horas) são, em geral, administrados antes dos resultados dos ensaios de controle de qualidade, ou seja, da comprovação de que os radiofármacos manipulados possuem as características de um produto seguro (ANVISA, 2009).…”

“…A BPF estabelece requisitos mínimos para o registro dos radiofármacos no país. Às instituições envolvidas com a produção dos radiofármacos são exigidos relatórios de caráter técnico e de produção e controle de qualidade, dos quais devem constar algumas exigências gerais e específicas em relação aos radionuclídeos e radiofármacos (ANVISA, 2009).…”

“…Para garantir as exigências estabelecidas pela BPF são necessárias análises envolvendo características radiometrológicas, físico-químicas, radioquímicas, biológicas e microbiológicas (Sahagia, 2013;Almeida, 2009)  Parâmetro Radiometrológico A pureza química é definida pela razão da massa das moléculas do composto de interesse, no estado químico, em relação à massa total da preparação (ANVISA, 2009). Sua determinação é importante para evitar que a toxidade das impurezas seja absorvida pelo organismo do paciente.…”

“…A presença das impurezas pode estar associada ao processo de preparação do radiofármaco. Dessa forma, é importante determinar quantitativamente e qualitativamente os reagentes e produtos químicos (não radioativos), utilizados neste processo (Almeida, 2009).…”