Desenvolvimento de uma Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) para detecção de Brucella spp. em amostras de sangue de cães naturalmente infectados

Vieira, Nanci do Rosário

doi:10.11606/d.10.2004.tde-16062005-103008

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“…PCR has been developed to improve the identification of Brucella spp. and to contribute to the diagnosis of canine brucellosis (Bricker, 2002;Vieira, 2004;Keid et al, 2007b).…”

Section: /7mentioning

confidence: 99%

“…The peripheral blood samples from the dogs were submitted to the nucleic acid extraction protocol described by Vieira (2004). Samples of semen and urine were inoculated in the tryptose broth and incubated at 37 °C for 21 days, every 7 days for three consecutive weeks, 1ml was withdrawn and the same protocol was conducted for nucleic acids extraction from the peripheral blood.…”

Section: Dna Extraction and Pcrmentioning

confidence: 99%

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Detection of Brucella canis in blood, urine and seminal fluid of a naturally infected dog by PCR

Volkweis¹,

Cavalcanti²,

Blume³

et al. 2018

Braz. J. Vet. Med.

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Canine Brucellosis is a bacterial infectious disease that affects dogs around the world. The laboratory diagnosis is based on direct and indirect methods and should be performed when there is evidence from clinical and epidemiological signs. In this study, we observed scrotal dermatitis recurrent and resistant to treatment in six years dog, Golden Retriever. An AGID serological test for brucellosis was positive. However, serological tests may show unspecific reactions and false positive results. Blood culture is indicated as a confirmatory test. The result of the culture was negative in all materials tested (blood cultures, urine culture and semen in tryptose broth and blood agar). Thus, the blood, urine and semen samples were tested by PCR and all samples tested were positive. After castration, the histologic evaluation showed inflammatory infiltrate in the epididymis. Vacuolar degeneration of the germinal epithelium of the seminiferous tubules was observed in the testicular parenchyma without testicular atrophy. Morphological semen evaluation showed sperm abnormalities as strongly folded tail, loose heads, curly tails, head-head, corroborating the diagnosis of brucellosis. PCR was crucial to the canine brucellosis final diagnosis, demonstrating the high sensitivity and efficiency of this test, suggesting that PCR should be included as a confirmatory test, aimed at preventing the spread of this important zoonosis.

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“…PCR has been developed to improve the identification of Brucella spp. and to contribute to the diagnosis of canine brucellosis (Bricker, 2002;Vieira, 2004;Keid et al, 2007b).…”

Section: /7mentioning

confidence: 99%

Section: Dna Extraction and Pcrmentioning

confidence: 99%

Detection of Brucella canis in blood, urine and seminal fluid of a naturally infected dog by PCR

Volkweis¹,

Cavalcanti²,

Blume³

et al. 2018

Braz. J. Vet. Med.

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show abstract

“…A PCR foi empregada com sucesso para a detecção de Brucella em vários tipos de amostras biológicas provenientes de diversas espécies hospedeiras, como sangue (AL-NAKKAS et al, 2002;WRIGHT, 2005;ELFAKI et al, 2005a;GUARINO et al, 2000;LEAL-KLEVEZAS et al, 1995MATAR;KHNEISSER;ABDELNOOR, 1996;COLMENERO, 1998;CASAL;SOLERA, 2004;NAVARRO et al, 1999NAVARRO et al, , 2002NIMRI, 2003;QUEIPO-ORTUNO et al, 1997;VIEIRA, 2004;ZERVA et al, 2001), soro (ELFAKI et al, 2005b;ZERVA et al, 2001), leite (HAMDY; AMIN, 2002;LEAL-KLEVEZAS et al, 1995RIJPENS et al, 1996;ROMERO et al, 1995;LOPEZ-GONI, 1999;SREEVATSAN et al, 2000;TANTILLO et al, 2001;) MUSTAFA; WRIGHT, 2005;ELFAKI et al, 2005a;GUARINO et al, 2000;LEAL-KLEVEZAS et al, 1995MATAR;KHNEISSER;ABDELNOOR,1996;COLMENERO, 1998;MORATA et al, 1999;NAVARRO et al, 1999NAVARRO et al, , 2002NIMRI et al, 2003;QUEIPO-ORTUÑO et al, 1997, 1999…”

Section: Diagnóstico Pela Reação Em Cadeia Pela Polimeraseunclassified

“…Além disso, foram realizadas lavagens no pellet de leucócitos com tampão TE previamente à extração de DNA, para reduzir o efeito inibitório do grupo heme das hemácias (MORATA; QUEIPO-ORTUÑO; COLMENERO, 1998;VIEIRA, 2004 Doze cães foram negativos na SAR apesar de infectados, sendo que nove foram positivos apenas pela hemocultura, um positivo pela hemocultura e cultivo de sêmen e dois positivos pela hemocultura e cultivo de swab vaginal.…”

Section: Avaliação Das Proporções De Positivos Diagnosticadas Pelos Tunclassified

Avaliação de métodos diretos e indiretos de diagnóstico da brucelose em cães naturalmente infectados

Keid¹

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.Foram comparados procedimentos laboratoriais diretos e indiretos aplicados ao diagnóstico da brucelose canina causada por Brucella canis. Foram examinados 196 cães, os quais foram classificados em infectados, suspeitos e não infectados, de acordo com resultados obtidos no cultivo microbiológico em amostras de sangue, sêmen e swab vaginal, no exame clínico e de acordo com dados epidemiológicos. Os resultados obtidos nos exames laboratoriais foram correlacionados com os resultados dos exames clínicos. As técnicas laboratoriais empregadas foram soroaglutinação rápida (SAR), soroaglutinação rápida com emprego do 2-mercaptoetanol (SAR-2ME), imunodifusão em gel de ágar (IDGA), cultivo microbiológico e PCR em amostras de sangue, sêmen e swab vaginal. Foram observados 41,83% de positivos pela SAR, 14,28% pela SAR-2ME, 28,14% pela IDGA, 32,14% pela hemocultura, 19,6% pelo cultivo microbiológico de sêmen, 4,82% pelo cultivo microbiológico de swab vaginal, 33,16% pela PCR em sangue, 33,33% pela PCR em sêmen e 26,89% pela PCR em swab vaginal. Os valores de sensibilidade das provas de SAR, SAR-2ME, IDGA, PCR em sangue e PCR em swab vaginal foram respectivamente de 81,25%; 42,18%; 75%; 89,06% e 54%. A especificidade dos métodos de SAR, SAR-2ME, IDGA, PCR em sangue e PCR em swab vaginal foram respectivamente de 81,25%; 100%; 100%; 97,21% e 97,14%. Nos cães machos, as proporções de resultados positivos diagnosticados pelo cultivo microbiológico de sêmen foram semelhantes às observadas pelos demais métodos de diagnóstico utilizados. As proporções de resultados positivos obtidos pelas técnicas de SAR, SAR-2ME, IDGA, hemocultura, PCR em sangue e cultivo de swab vaginal foram maiores dentre os animais que apresentaram sinais clínicos sugestivos de brucelose. Não houve associação entre a presença de sinais clínicos de brucelose e resultados positivos pelo cultivo microbiológico de sêmen e PCR em amostras de sêmen e swab vaginal.

show abstract

“…Alíquotas da solução de DNA de cada amostra-padrão oriunda do ensaio de culturas puras, bem como alíquotas da solução de DNA obtidas das amostras de homogeneizado de órgãos para os três protocolos de extração de DNA, foram diluídas 1:100 em água ultrapura obtida em aparelho Milli-Q-Millipore INC (Billerica MA USA) e submetidas à leitura espectrofotométrica nos comprimentos de onda 260 nM e 280 nM, em espectrofotômetro BECKMAN DU (BECKMAN, FULLERTON, CA, USA). A quantificação foi realizada para avaliar a qualidade e a concentração de DNA como realizada por Vieira (2004).…”

Section: Quantificação De Dnaunclassified

Avaliação de diferentes protocolos de extração de DNA para detecção de Brucella abortus a partir de materiais colhidos de feto abortado ou bezerros nascidos de vacas experimentalmente infectadas com a cepa 2308

Matrone¹

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Em primeiro lugar aos meus pais Julio e Marilurdes, pelo amor, confiança e ensinamentos em todos os dias de minha vida. A eles devo tudo o que sou e também o que um dia serei. Obrigado por existirem e por me mostrarem o caminho de Deus e da honestidade dos homens. Aos meus irmãos Mauricio e Marcella, por todo amor, união, carinho e apoio, sempre presentes desde o inicio da minha existência. Amo vocês. Aos meus cunhados Rui e Patrícia, pela amizade e carinho, sempre me apoiando e ajudando na realização de muitas conquistas. Às minhas avós Julia e Lourdes pelo amor e ensinamentos durante toda minha vida Aos animais, por serem essenciais à vida humana, em especial, meus amados companheiros Francesca, Luigi, Filippo Tedesco e Minnie, por fazerem parte da minha história de vida e por estarem presentes em muitos pedaços deste trabalho, sempre transmitindo paz, cumplicidade e amor. AGRADECIMENTOS A Deus, porque acima de tudo é a pessoa mais importante da minha vida, estando presente em todos os dias da minha caminhada, me transmitindo luz, fé, sabedoria e força para enfrentar os obstáculos que surgem no decorrer da nossa existência. Ao Prof. Dr. José Soares Ferreira Neto, pela amizade, confiança e oportunidade em realizar esta dissertação. As Profas. Simone e Evelise pela amizade e força durante a realização deste trabalho. Aos Profs. Rodrigo Martins Soares e Paulo Eduardo Brandão, por me ajudarem na realização do projeto, sempre com disponibilidade em ajudar. Ao Prof. Fernando Ferreira pela paciência e ajuda em toda parte estatística da minha dissertação. Ao César Alejandro Rosales Rodrigues, pela amizade e apoio, e por transmitir seus conhecimentos moleculares durante a realização do trabalho. A amiga Lara Borges Keid, pelo companheirismo, amizade e ensinamentos, que foram peças fundamentais para a realização total do projeto.

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Desenvolvimento de uma Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) para detecção de Brucella spp. em amostras de sangue de cães naturalmente infectados

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Detection of Brucella canis in blood, urine and seminal fluid of a naturally infected dog by PCR

Detection of Brucella canis in blood, urine and seminal fluid of a naturally infected dog by PCR

Avaliação de métodos diretos e indiretos de diagnóstico da brucelose em cães naturalmente infectados

Avaliação de diferentes protocolos de extração de DNA para detecção de Brucella abortus a partir de materiais colhidos de feto abortado ou bezerros nascidos de vacas experimentalmente infectadas com a cepa 2308

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