Desenvolvimento de um teste rápido microfluídico para detecção de sulfonamidas em leite a partir de ensaios colorimétricos

Abstract

DEDICATÓRIAAos meus pais, Nilcéia e José Augusto, e ao meu irmão, André, por todo apoio, compreensão e auxílio. 6 AGRADECIMENTOSA Deus, por todas as oportunidades, por todos os momentos de intuição, pela saúde e por me possibilitar conduzir essa pesquisa.Ao Prof. Dr. Emanuel Carrilho, pela oportunidade de trabalho, por toda orientação, aprendizagem, confiança, auxílio e compreensão.Aos meus pais, José Augusto e Nilcéia, e ao meu irmão, André, por todo apoio, incentivo, por toda compreensão e ajuda em todos os momentos. Agradeço a vocês pela pessoa que sou e por tudo que conquistei.À Ana Carolina Urbaczek, pela amizade, compreensão e ajuda nos momentos difíceis. A todos os membros do Grupo de Bioanalítica, Microfabricação e Separações (BioMicS).À CAPES, pelo apoio financeiro.Aos professores e funcionários do IQSC e da USP.A todos que me acompanharam, apoiaram e ajudaram nesses sete anos em São Carlos. 7 RESUMOO uso de antibióticos em animais de produção pode ser ministrado de diferentes formas: i) como método de prevenção de doenças, ii) como tratamento e combate de doenças como mastite, infecções respiratórias, genitais e oftálmicas, e iii) aplicados às rações, a fim de aumentar o ganho de peso, promovendo também a eficiência de aproveitamento dos alimentos e tornando menores os índices de morbidez e mortalidade. No entanto, alguns produtores utilizam os antibióticos de forma inadequada, ministrando o mesmo em dosagens superiores às recomendadas ou até mesmo adicionando os antibióticos diretamente no leite, a fim de inibir o crescimento indesejável de bactérias, o que pode causar graves riscos à saúde humana. Uma das maneiras de se detectar resíduos de antibióticos (sulfonamidas) em leite é a partir da reação enzimática entre a anidrase carbônica e um éster (4-nitrofenil acetato), que gera uma coloração amarelo brilhante. As sulfonamidas inibem tal reação, impedindo o surgimento de cor. Dispositivos microfluídicos fabricados em papel (µPAD) foram desenvolvidos como um novo método simples, rápido, portátil e de baixo custo, a fim de se detectar a presença ou ausência das três principais sulfonamidas (sulfametazina, sulfadimetoxina e sulfatiazol), como exigido pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA).A imobilização de uma fina camada uniforme de pasta de metil celulose, nos spots dos microdispositivos, permitiu maior estabilidade na superfície reacional do papel, de forma a alcançar limites de detecção (LOD) menores, equivalentes à 2,80 µmol L -1 (7,79x10 -7 g mL -1 ) para a sulfametazina, 2,70 µmol L -1 (8,37x10 -7 g mL -1 ) para a sulfadimetoxina e 2,50 µmol L -1 (6,38x10 -7 g mL -1 ) para o sulfatiazol. O método apresentou, como principal vantagem, a análise das amostras de leite bovino sem qualquer tratamento prévio. Além disso, o método apresentou boa linearidade e repetitividade nos ensaios realizados intra-dia e inter-dia, além de se mostrar seletivo para compostos da classe das sulfonamidas, mostrou-se também robusto com relação a alterações na temperatura do leite bovino. Dessa forma, o test...