Desenvolvimento de plataformas de diagnóstico uniplex e multiplex para infecção com arbovírus utilizando proteínas recombinantes.

Abstract

Os vírus Dengue (DENV), Zika (ZIKV) e Chikungunya (CHIKV) são arbovírus evidentes no cenário internacional atual que apresentam dificuldade na geração de dados epidemiológicos acurados. Tal fato ocorre devido à grande semelhança dos sintomas clínicos compartilhados pelas doenças, além da elevada reação cruzada observada entre alguns desses vírus quando avaliados em testes de diagnóstico sorológico. A disponibilidade de testes sorológicos sensíveis, específicos e de baixo custo contra esses vírus ainda é limitada no país. Diante disso, o presente projeto teve por objetivo desenvolver plataformas de diagnóstico sorológico uniplex (ELISA) e multiplex (Luminex), baseadas em formas recombinantes de proteínas DENV, ZIKV e CHIKV. Após avaliação in silico, porções da proteína não estrutural 1 (NS1) de DENV e ZIKV (denominadas ∆NS1 ZIKV e ∆NS1 DENV1-4), e da proteína 2 do envelope (E2) de CHIKV (denominada E2.1 CHIKV) apresentaram baixa homologia entre si e com as mesmas regiões de vírus próximos a DENV, ZIKV e CHIKV, sendo escolhidas como antígenos de diagnóstico. As proteínas foram implementadas nas plataformas de sorodiagnóstico, as quais foram otimizadas e validadas com a utilização de painéis de soros humanos fornecidos por colabores. Todos os testes gerados na plataforma de ELISA apresentaram valores de sensibilidade e especificidade iguais ou superiores aos testes atualmente disponíveis no mercado, com destaque para o teste ELISA ZIKV, o qual proporcionou uma parceria público privada que culminou na aprovação da sua comercialização pela ANVISA. Resultados similares foram observados com a implementação dos antígenos à plataforma Luminex, corroborando o potencial dos antígenos desenvolvidos. O sucesso do desenvolvimento do presente projeto salienta a importância do estudo e do desenvolvimento de metodologias diagnósticas, bem como ilustra de forma clara como a pesquisa acadêmica pode ser feita em sintonia com empresas voltadas para o desenvolvimento de tecnologias na área da saúde.