Desenvolvimento de modelos animais de terapia gênica para o hormônio de crescimento utilizando queratinócitos transduzidos e injeção direta de DNA plasmidial

Abstract

Agradeço em especial à minha orientadora e mestra Dra. Cibele Nunes Peroni, pela oportunidade, orientação, confiança e amizade tão importantes para a minha formação profissional e humana. Ao Dr. Paolo Bartolini, meu "co-orientador", pela amizade, incentivo e apoio em todas as fases deste projeto. Ao Dr. Carlos R. J. Soares e à Dra. Maria Teresa Ribela, pela amizade e incentivo. À Claudia Cecchi e à Eliza Higuti pela ajuda na realização dos experimentos e pelos ensinamentos. Aos amigos do Centro de Biotecnologia do IPEN pela ajuda e apoio: Arlete,

Produção de vetores lentivirais em condições escalonáveis para geração de células T-CAR para terapia celular

“…Estudos posteriores permitiram a compreensão de novos princípios genéticos e mecanismo de vias moleculares que demonstraram novos alvos terapêuticos para este tipo de terapia (LEUNG et al, 2010). Atualmente diversos estudos clínicos têm sido realizados utilizando terapia gênica para o tratamento de câncer, doenças cardiovasculares, autoimunes, monogênicas, infecciosas e neurológicas (OLIVEIRA, 2010;DUNBAR et al, 2018). Segundo o banco de dados Clinicaltrials.gov até o fim de 2020 foram aprovados, no mundo, 647 ensaios clínicos envolvendo terapia gênica, dos quais 54% são destinados a algum tipo de câncer (https://clinicaltrials.gov/ct2/home, acesso em 21 de dezembro 2020).…”

“…A utilização de aditivos antes ou durante a transfecção transiente têm sido uma estratégia bastante utilizada para aumentar a eficiência de transfecção e a produtividade final. Aditivos como a cloroquina aumentam o pH de endossomos e lisossomos, fato que ajuda a prevenir a degradação do DNA transfectado (PARK et al, 2000). O DMSO é utilizado uma vez que aumenta a porosidade da membrana celular e assim facilita a entrada do complexo de DNA/PEI melhorando a eficiência da transfecção transiente (YE et al, 2009).…”

“…A velocidade específica máxima de crescimento (µmáx), calculada na fase exponencial (48-96 horas) foi de 0,022 h -1 e o tempo de duplicação foi de 31,06 horas. Outros estudos utilizando células HEK 293 cultivadas em suspensão em meios isentos de SFB obtiveram valores de µmax na faixa de 0,018 -0,037 (PETIOT et al, 2011;NADEAU et al, 2001;SIEGWART et al, 1999).…”

“…O fator de conversão glicose em lactato (Ylac/gli) foi de 0,93 mol de lactato/mol de glicose, a taxa específica de consumo de glicose (qgli) foi de 0,768 µg/10 6 células/h e a velocidade específica de produção de lactato (qlac) foi de 1,87 µg/10 6 células/h. A literatura apresenta resultados do fator de conversão em células HEK293 adaptadas à suspensão sem SFB na faixa de 0,50-0,79 mol de lactato/mol de glicose (PETIOT et al, 2011;SIEGWART et al, 1999). percebe-se que houve consumo simultâneo de glicose e lactato.…”

“…Em 72 horas de cultivo a concentração de lactato foi de 2 g/L, esta concentração é considerada inibitória e prejudicial ao crescimento das células e este fato pode explicar a perda de viabilidade. Considera-se uma concentração não inibitória de lactato 20mM (1,78 g/L) (CRUZ et al, 2000;PETIOT et al, 2011;BIAGGIO et al, 2015).…”