Correlation of mutagenesis level with expression of reparative enzyme O6-methylguanine DNA methyltransferase during establishment of cell lines in vitro

Abstract

Long-term cultivation of cell lines inevitably leads to genetic and epigenetic changes. Aim. A comparative analysis of karyotype and level of the expression of reparative enzyme O 6 -methylguanine-DNA-methyltransferase (MGMT) at different stages of establishment and stabilization of human cell line 4BL and cell line of mouse germ cells G1. Methods. The set of methods was used to research the dynamics of karyotypes changes: the differential staining of chromosomes, FISH-method and comparative genomic hybridization. The level of MGMT expression was analyzed by PCR reaction and Western blot analysis. Results. General trends of establishment of mouse and human cell lines were revealed: at the first stage, which is characterized by increased structural instability of the genome, an increase in the MGMT expression was revealed while at the second stage of stabilization -a decrease in the expression. Therefore, almost complete disappearance of MGMT protein in unmodified form (24 kDa) is observed. Conclusions. Statistically significant correlation between MGMT repair enzyme and mutations induction processes during mammalian cell adaptation and cell line establishment to in vitro was described.

Stem potential of the new human cell line 4BL

“…Етап становлення клітинної лінії з певними властивостями із гетерогенної популяції первинної культури та адаптація до умов культивування супроводжуються зміною модального числа каріотипу, значними перебудовами цілих хромосом, що тягне за собою зміну експресії численних генів, включаючи онкогени й онкосупресори. Раніше проведені нами дослідження каріотипічної еволюції в динаміці [13,14] свідчать, що клітинна лінія 4BL вже пройшла етап становлення і нині знаходиться на етапі стабілізації та зберігає білядиплоїдний модальний клас, що робить її перспективною для використання як моделі. Особливості морфології клітинної лінії 4BL (здатність формувати колові асоціації, що нагадують кров'яні острівці), утворення ембріоїдних тілець у напіврідкому агарі [15], її походження з периферійної крові, а також значний час відтворення без явних ознак кризи та старіння дає підстави передбачити стовбуровий потенціал у цієї популяції клітин.…”

Influence of some biologically active substances on amount of MGMT and MARP proteins in human cells in vitro

“…The Hep-2 cells usually have both proteins (Fig. 1, lane 1) as well as the 4BL cells in early passages [26]. However, after prolonged cultivation (more than 130 passages) the 4BL cells have lost the conventional MGMT protein (Fig.…”