Construction and characterization of normalized cDNA library of maize inbred MO17 from multiple tissues and developmental stages

Construction, Characterization, and Expressed Sequence Tag (EST) Analysis of Normalized cDNA Library of Thermo-Photoperiod-Sensitive Genic Male Sterile (TPGMS) Wheat from Spike Developmental Stages

“…Although, there are several strategies that could be utilized for normalization (Ko 1990;Soares et al 1994), a new method based on saturation hybridization with genomic DNA has been effectively used in rice and maize (Chu et al 2003;Zhang et al 2005). In our study, this approach was followed to construct a normalized cDNA library of TPGMS wheat.…”

Large-Scale Investigation of Soybean Gene Functions by Overexpressing a Full-Length Soybean cDNA Library in Arabidopsis

“…Reverse transcription primers were a combination of 5SM4Z, 5SM4ZA, and 5SM4ZB in a ratio of 1:1:1 (5SM4Z: GCC ATT ACG GCC AAG TTA C XXXX X-3′, 5SM4ZA: GCC ATT ACG GCC AAG TTA C XXXX-3′, 5SM4ZB: GCC ATT ACG GCC AAG TTA C XXX-3′, X = modified G). Subsequently, normalization was performed according to Patanjali et al (1991) , Soares et al (1994) , Zhang et al (2005) , and Li et al (2012) . Later, the normalized cDNAs were integrated into the pJL12 vector using T4 DNA ligase (Thermo Scientific) and transformed into DH5α for propagation and storage.…”

Establishment and Identification of a Normalized Full-Length cDNA Library of CCRI 36

“…原料。由于我国人多地少, 粮棉争地的矛盾非常突 出。短季棉品种由于生育期短、开花结铃集中、简 化管理的优点, 在麦棉两熟或多熟制栽培体系中发 挥着重要作用 [1] 。在植物的生活周期中, 最明显的变 化是营养生长到生殖生长的转变, 转折点是花芽分 化。从花芽分化开始, 除一般的生理生化代谢外, 核 酸代谢至关重要, 即 RNA 和 DNA 含量的积累是花 器官发育的必要条件, 这已在苍耳 [2] 、牵牛 [3] 、苹果 [4] 、 葡萄 [5] 等植物中得到证实。李丽等 [6] 认为, 在花芽诱 导过程中, 不仅需要有较多的 RNA 和较少的 DNA, 而且还需要较高的 RNA/DNA。近年来, 已从几种模 式植物, 如拟南芥 [7][8] 、金鱼草 [9] 、烟草 [10] 等分离克 隆了大量与植物开花有关的调控基因。并建立起在 花器官发育中同源异型基因作用的 ABC 模型 [11][12] 。 全长 cDNA 是功能基因组学和比较基因组学研 究的基础 [13] , 而用适当的方法筛选全长 cDNA 文库, 己成为从真核生物细胞中高效获得全长 cDNA 的有 效途径。目前, 棉花在分子生物学水平上的研究还 远远滞后于水稻、玉米等作物, 因此要克隆棉花中 一些重要基因, 最好的途径是构建代表特定时期全 部细胞表达信息的 cDNA 文库, 并从中筛选相关基 因的阳性克隆。Pear 等 [14] 构建了陆地棉纤维(Acala SJ-2)的 cDNA 文库, 对棉花的 celA 基因进行了研 究。Li 等 [15] 构建了陆地棉 Coker312 纤维的 cDNA 文库, 并从中得到全长 GhTUB1 cDNA。近年来, 已 构建的棉花 cDNA 文库也多与棉花纤维发育时期有 关 [16][17] , 用于筛选与棉花纤维品质相关基因, Ji 等 [18] 利用 subtractive PCR 和 cDNA array 分离并且分析了 陆地棉徐州 142 纤维发育早期表达的基因。而棉花 其他组织器官的 cDNA 文库构建相对较少。 Clontech(美国)公司推出的 SMART 技术 [19] 是目 前应用最广泛的构建全长文库的方法之一。而高丰 度的基因给 cDNA 文库的筛选造成了大量的重复性 工作和资源浪费, 尤其不适应 EST(序列表达标签) 测序。为了解决这个问题, 开发了 cDNA 文库的均 一化技术, 它降低了高丰度基因的拷贝数, 使不同 丰度的基因的拷贝数趋于一致 [20] , 大大有利于目的基 因的筛选和高通量的 EST 测序。DSN (duplex-specific enzyme)是近年来发现的一种热稳定核酸酶 [21]…”