Construcción de un vector de expresión derivado de virus adenoasociados para corregir in vitro el defecto genético de la enfermedad de Morquio A

Abstract

Introducción.La mucopolisacaridosis IV A (Morquio A) es una enfermedad de depósito lisosómico causada por la deficiencia en la actividad de la enzima N-acetil-galactosamina-6-sulfato-sulfatasa que produce la acumulación intralisosómica de queratán y condroitín-6-sulfato. Hasta el momento, su manejo es paliativo, por lo que las investigaciones se han enfocado en establecer una terapia que pueda aplicarse tempranamente y garantice la expresión estable de la enzima. En este sentido, la terapia génica se presenta como una de las potenciales alternativas terapéuticas para corregir el defecto genético en la mucopolisacaridosis IV A. Objetivo. Construir vectores de expresión derivados de virus adenoasociados para corregir in vitro la deficiencia enzimática en la mucopolisacaridosis IV A. Materiales y métodos. Se produjeron vectores derivados de virus adenoasociados que portaban el gen humano de la enzima N-acetil-galactosamina-6-sulfato-sulfatasa dirigido por el promotor temprano del citomegalovirus humano, empleando un sistema libre de adenovirus. Se transfectaron células HEK293 y fibroblastos humanos Morquio A con los virus recombinantes, y se determinó la actividad enzimática en el lisado celular a las 24 y 48 horas después de la transfección. Resultados. Se obtuvieron virus adenoasociados recombinantes, libres de adenovirus, con títulos hasta de 2,08 x 10 10 cápsides/ml. Tanto en células HEK293 como en fibroblastos Morquio A transfectados, se obtuvieron actividades enzimáticas hasta de 3,05 nmoles/mg por hora, 48 horas después de la transfección. Conclusión. Los virus recombinantes producidos expresaron in vitro la enzima GALNS en las células transfectadas. Estos resultados constituyen el paso inicial para el desarrollo de una terapia génica para la enfermedad de Morquio A empleando vectores derivados de virus adenoasociados.

An Animal Model of Acute and Chronic Chagas Disease With the Reticulotropic Y Strain of Trypanosoma cruzi That Depicts the Multifunctionality and Dysfunctionality of T Cells

“…For instance, C57BL/6 mice are more resistant to T. cruzi infection than BALB/c mice, which show intermediate resistance to parasite infection (33, 61). In addition, T. cruzi is a parasite that includes different genetic lineages, known as DTUs (62), which have shown different tropisms (e.g., of the reticulotropic or myotropic strains) and infection outcomes in experimental models of ChD that causes heart, gastrointestinal tract, or liver pathologies (48, 60). For example, a lower parasite load has been observed in chronic T. cruzi -infected mice than in acutely infected mice (63), but these results can vary, even in studies using the same parasite strain (64).…”

“…cruzi kinetoplast DNA, and the primers TcH2AF 5′-CGAGCTCTTGCCCACACGGGTGCT-3′ and TcH2AR 5′-CCTCCAAGCAGCGGATAGTTCAGG-3′, based on T . cruzi satellite DNA which amplify a fragment present in the non-coding region of the histone H2A from T. cruzi , using previously described conditions (48, 49). Subsequently, quantitative PCR (qPCR) was performed with the Cruzi 1 5′-ASTCGGCTGATCGTTTTCGA-3′ and Cruzi 2 5′-AATTCCTCCAAGCAGCGGATA-3′ primers and the Cruzi 3 5′-6FAM-CACACACTGGACACCAA-BBQ-3′ probe, which amplify a 166-bp segment of T. cruzi satellite DNA (50).…”

Estudios Bioquímicos De Los Errores Innatos Del Metabolismo en Colombia, Durante Dos Décadas

“…En este artículo se describen algunos de los trabajos en que ha participado el autor a lo largo de más de cuatro lustros, en cuanto a diagnóstico, tratamiento, estudios de mutaciones en los genes responsables de algunas de estas enfermedades. Nuestros aportes en la investigación en Terapia de Reemplazo Enzimático (TRE), (Landázuri et al, 2009;Córdoba et al, 2009;Poutou et al, 2005), Terapia Génica (TG) (Gutiérrez et al, 2008;Alméciga et al, 2009) y nuevos métodos de diagnóstico (Tomatsu et al, 2004b;Tomatsu et al, 2004c) aparecen en algunas publicaciones recientes, por lo cual se citan pero sólo se comentan brevemente.…”

“…Desde hace cerca de ocho años hemos venido trabajando en la construcción de vectores derivados de virus adenoasociados para terapia génica. Usando esos vectores hemos logrado reparar el defecto in vitro para las enfermedades de Morquio y de Hunter e in vivo usando animales Morquio transgénicos (Gutiérrez et al, 2008;Alméciga et al, 2009). Hemos avanzado en la expresión de niveles más altos de la enzima galactosamina 6 sulfato sulfatasa in vitro e in vivo usando vectores derivados de virus adenoasociados, un activador de las sulfatasas, el SUMF1, y promotores eucarióticos que nos permiten mejores niveles de expresión que con el promotor de citomegalovirus, usado tradicionalmente en eso estudios.…”