Comparación de una prueba de PCR basada en los genes codificantes para la histona H2A/SIRE con pruebas serológicas convencionales para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas crónica en pacientes colombianos

Abstract

Comparación de una prueba de PCR basada en los genes codificantes para la histona H2A/SIRE con pruebas serológicas convencionales para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas crónica en pacientes colombianos Introducción. El diagnóstico de la enfermedad de Chagas en sus fases latente y crónica se dificulta por la baja parasitemia, razón por la cual se recurre a métodos serológicos y moleculares. Objetivo. Comparar la prueba de reacción en cadena de la polimerasa basada en la amplificación del elemento SIRE insertado en el gen que codifica para la histona H2A con las pruebas serológicas convencionales para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas en pacientes colombianos. Materiales y métodos. Se realizó un estudio de concordancia comparando la PCR TcH2AF/ R con las pruebas de inmunoensayo enzimático e inmunofluorescencia indirecta, determinándose además la sensibilidad y especificidad de la prueba. Se clasificaron y examinaron 156 individuos según los hallazgos clínicos y epidemiológicos y los resultados de las pruebas serológicas. Adicionalmente, 97 de las 156 muestras fueron comparadas con la PCR S35/S36. Resultados. De 156 muestras, 89 (57%) fueron positivas por IFI y ELISA, y 84 (53,8%) presentaron el perfil de amplificación correspondiente a la banda esperada de 234 pb, obteniéndose una sensibilidad de 88% (I.C. 95%: 75% -95%) y especificidad de 92,5% (I.C. 95%: 87,7% -97,2%). El índice kappa, indicador de concordancia entre las pruebas serológicas y TcH2AF/R fue de 0,8 (I.C. 95%: 73% -86%), en tanto entre las PCR TcH2AF/R y S35/S36 fue de 0,9 (I.C. 95%: 84% -96%), interpretados como una concordancia buena y casi perfecta, respectivamente. Conclusiones. La PCR TcH2AF/R es una prueba diagnóstica promisoria complementaria a las pruebas serológicas, para la detección de Trypanosoma cruzi.Palabras clave: reacción en cadena de la polimerasa, histonas, miocardiopatía chagásica, Trypanosoma cruzi. Comparison of a PCR test based on the histone H2A/SIRE genes with classical serological tests for the diagnosis of chronic Chagas disease in Colombian patientsIntroduction. Diagnosis of Chagas disease in its latent and chronic phase is difficult because of the low parasitemia levels. Therefore, serological and molecular techniques are necessary to achieve an appropriate diagnosis. Objective. The polymerase chain reaction based on the amplification of the SIRE element inserted into H2A encoding genes was compared with classical serological tests for the diagnosis of Chagas disease in Colombian patients. 84Biomédica 2007;27(Supl. 1):83-91 GIL J., PAVÍA P., MONTILLA M. et al Materials and methods. An agreement study was carried out by comparing the PCR with ELISA (enzyme linked immuno sorbent assay) and IFAT (indirect immunofluorescence) tests. In addition, the PCR sensitivity and specificity were determined. A sample of 156 individuals was tested with the H2A PCR primers after a Chagas disease classification based on clinical, epidemiological and serological data associated with each patient. In addition, 97 out of 156 ...

Evaluación preliminar de la prueba comercial “Chagas (Trypanosoma cruzi) IgG-ELISA®” en individuos colombianos

“…Si bien en Colombia se han empleado distintas pruebas de ELISA (29)(30)(31)(32)(33)(34)(35), estas, por lo general, incluyen lisados proteicos de cepas pertenecientes a la DTU I, pues es la DTU de mayor circulación en el país (35). Sin embargo, en nuestro medio existen reportes del hallazgo en pacientes chagásicos de las DTU II, III, IV y VI (35)(36)(37)(38)(39)(40)(41).…”

Evaluación de las pruebas de PCR TcH2AF-R y S35-S36 para la detección de Trypanosoma cruzi en tejido cardiaco de ratón

“…Se utilizaron los iniciadores TcH2AF (5'-GAGAGTGATCGTGGGAGAGC-3') y TcH2AR (5'-AGTGGCAGACTTTGGGGTC-3'), los cuales permiten la amplificación de una banda de 230 pb de la región 3' no codificante de la unidad de 1,2 kb perteneciente al gen que codifica para la histona H2A y a los nucleótidos 16 a 246 del elemento SIRE (10)(11)(12) (11). También se utilizaron los iniciadores denominados S35 (5'-AAATAATGTACGGG(T/G)GAGATGCATGA-3') y S36 (5'-GGGTTCGATTGGGGTTGGTGT-3'), los cuales amplifican un fragmento de 330 pb derivado de la región variable de los minicirculos de T. cruzi (13,20).…”