Comparación de la viabilidad y crecimiento en cultivo de células madre adultas obtenidas de tejido adiposo pre y post congelamiento

Abstract

ResumenObjetivo. Comparar viabilidad, crecimiento en cultivo, fenotipo y diferenciación a linaje osteogénico de ADAS (Adipose-Derived Adult Stem Cells) pre y post congelamiento. Método. Se obtuvieron muestras de TA de individuos sanos que fueron sometidos a liposucción, con posterior digestión enzimática con Colagenasa I. La fracción vascular estromal (FVE) obtenida fue dividida equitativamente en dos fracciones una de las cuales fue criopreservada y almacenada a -196°C y la otra cultivada hasta pase uno antes de ser criopreservada. Ambas fracciones fueron criopreservadas en cámara de congelamiento automatizada utilizando dos soluciones de congelamiento: (A) Dimetilsulfóxido (DMSO)/Dextrano40/albúmina sérica humana (HSA) y (B) DMSO/HESSICO/HSA, mantenidas 3 meses a -196°C y descongeladas con buffer fosfato salino (PBS)/HSA/HESSICO. Posterior a su descongelamiento fueron sometidas a cultivo, recuento, viabilidad celular, fenotipificación y potencial osteogénico. Resultados. Las células congeladas con la solución crioprotectora DMSO/Dextrano40/ HSA y con un cultivo previo al congelamiento, presentaban porcentajes de viabilidad más altos y alcanzaban confluencia del 80% en cultivo en menos tiempo. Las muestras expandidas no presentaron diferencias en el fenotipo por citometría de flujo y mostraron diferenciación a linaje osteogénico.Palabras clave: células madre mesenquimales, tejido adiposo, criopreservación. AbstractObjective. Comparing viability, growth in culture, phenotype and osteogenic lineage differentiation of Adipose-Derived Adult Stem Cells (ADAS) pre and post freezing. Method. Samples were obtained from adipose tissue of healthy individuals who underwent liposuction, with later enzymatic digestion with collagenase I. The stromal vascular fraction (SVF) obtained was divided equally into two fractions one of which was cryopreserved and stored at -196 °C and the other one cultivated to passage 1 (P1) before being cryopreserved. Both fractions were cryopreserved in an automated freezing chamber using two freezing solutions: (A) DMSO/Dextran40/HSA and (B) DMSO/HESSICO/HSA kept, both were kept 3 months at -196°C and thawed in PBS/HSA/ HESSICO. After thawing, both were subjected to cultivation, recount, cell viability, phenotyping and osteogenic potential. Results. Cells that were frozen with cryoprotectant solution DMSO/ Dextran40/HSA and a pre-freezing culture exhibited higher viability percentages and reached 80% culture confluence in less time. Expanded samples showed no differences in the phenotype by flow cytometry and showed differentiation to osteogenic lineage.