Comparación de dos protocolos de extracción de ADN de Trypanosoma cruzi cultivados en medio axénico

Abstract

Materiales y métodos. Se cultivaron epimastigotas de T. cruzi en condiciones exénicas obteniéndose masas entre 1,5 hasta 100 x 10 6 parásitos. A partir de estas se procedió a la extracción de ADN mediante dos protocolos: extracción con solventes orgánicos (fenol/cloroformo), y empleo de resina (Chelex ® 100), a partir de los diferentes sedimentos parasitarios. La concentración y pureza del ADN se determinó por espectrofotometría y la integridad se evaluó mediante electroforesis en geles de agarosa. Se realizó el análisis de varianza y comparaciones de medias mediante la prueba de Tukey, utilizando el software Statistix 8.0. Resultados. Se realizaron diez extracciones de ADN de cada una de las diferentes cantidades de parásitos sedimentados. En la extracción de ADN con la resina Chelex ® 100 se obtuvo mayor rendimiento, pero menor pureza e integridad respecto a la extracción con solventes orgánicos. Sin embargo, permitió la amplificación del producto de 330 pb de ADNk de T. cruzi. Conclusiones. Aun cuando la técnica de Chelex ® 100 proporcionó menor pureza e integridad del ADN, permitió la amplificación con éxito de ADNk por PCR, evitando el uso de técnicas laboriosas y solventes orgánicos tóxicos.

Parasite Burden of Trypanosoma cruzi in Whole Blood and Buffy Coat Determined by Real-Time PCR in Individuals with Chronic Chagas Disease

“…The measurement of DNA at 260/280 and 260/230 nm is a widely used tool to evaluate the correct extraction of DNA, which must safeguard the integrity of the DNA, with the least possible contamination, to obtain good performance and functionality of the analysis [ 46 ]. The A260/280 ratio makes it possible to verify contamination by proteins, which absorb at 280 nm, while at 230 nm contaminants such as chaotropic salts, phenols and carbohydrates absorb.…”

Comparación de métodos de extracción de ADN simples y económicos para el diagnóstico molecular de leptospirosis animal

“…En este trabajo, la resina Chelex tuvo una sensibilidad mayor de extracción en el ensayo controlado de orina, siendo el método que logró detectar la menor cantidad de ADN en comparación con los otros dos métodos cuando se sometió a PCR G1/G2. Se ha descrito el uso de la resina para la extracción de ADN de leptospiras a partir de otros tipos de muestra como sangre (Noda y Rodríguez, 2014a), tejidos humanos embebidos en parafina (Noda et al 2014b); también para el diagnóstico de otros patógenos, como Trypanosoma cruzi (López et al 2014).…”