Cisplatin-induced apoptotic endonuclease EndoG inhibits telomerase activity and causes malignant transformation of human CD4+ T lymphocytes

Abstract

1Научно-исследовательский биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича, 119121, Москва, ул. Погодинская, 10; эл. почта: zhdanovdd@mail.ru 2 Российский университет дружбы народов, экологический факультет, 117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая, 6 3 Институт теоретической и экспериментальной биофизики, 142290, Пущино, Московская область, ул. Институтская, 3Альтернативный сплайсинг пре-мРНК каталитической субъединицы hTERT (human Telomerase Reverse Transcriptase) играет важную роль в регуляции активности теломеразы. Увеличение количества неактивной сплайс-формы hTERT ингибирует теломеразную активность. Известно, что апоптотическая эндонуклеаза EndoG принимает участие в процессе альтернативного сплайсинга hTERT. Экспрессия EndoG возрастает в ответ на повреждения ДНК. Целью работы было изучение влияния повреждающего ДНК агента цисплатина на индукцию EndoG, альтернативный сплайсинг hTERT и активность теломеразы в CD4 + Т-лимфоцитах человека. Инкубация CD4 + Т-клеток с цисплатином вызывает повреждения ДНК и индукцию EndoG. Экспрессия EndoG сопровождается снижением синтеза полноразмерного активного варианта hTERT и увеличением экспрессии неактивного сплайс-варианта. Уменьшение количества полноразмерного варианта hTERT приводит к снижению теломеразной активности, укорочению длины теломер до критических значений, переходу клеток в состояние репликативного старения, активации апоптотических процессов и гибели клеток. Некоторые клетки остаются живыми и претерпевают злокачественную трансформацию. Злокачественно трансформированные клетки обладают повышенной теломеразной активностью и репликативным потенциалом, по сравнению с исходными CD4 + Т-клетками. Они имеют фенотип Т-клеточной лимфомы, а также обладают способностью формировать опухоли и вызывать гибель экспериментальных животных.

The Better Survival of MSI Subtype Is Associated With the Oxidative Stress Related Pathways in Gastric Cancer

“…On the other hand, ENDOG regulate the mRNA alternative splicing of hTERT ( 52 , 55 ). As the non-active splice variant hTERT increased, the activity of telomerase is suppressed and lead to the short telomere which acquired the replicated senescence for tumor cells ( 56 ). On the basis of these reasons, tumor cells have more opportunities and prone to be induced apoptosis and cell senescence in MSI subtype.…”

Highly Active Thermophilic L-Asparaginase from Melioribacter roseus Represents a Novel Large Group of Type II Bacterial L-Asparaginases from Chlorobi-Ignavibacteriae-Bacteroidetes Clade

“…CD4+ T cells were purified from PBMCs using CD4+ Human Isolation Kit (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach, Germany) according to the manufacturer's instructions. CD4+ T cells were seeded at 5 × 10 5 cell/mL and cultured in 25 cm 2 flasks in RPMI 1640 cell medium supplemented with 10% FBS, 5 µg/mL anti-CD28, 5 µg/mL anti-CD3 mAbs, and 100 U/mL rHu IL-2 [78]. All cell lines were cultivated in 5% CO 2 /95% air in a humidified atmosphere at 37 • C, and tested for mycoplasma contamination before the experiment using the Mycoplasma Detection Kit PlasmoTest™ (InvivoGen, San Diego, CA, USA).…”

Induction of apoptotic endonuclease EndoG with DNA-damaging agents initiates alternative splicing of telomerase catalytic subunit hTERT and inhibition of telomerase activity hTERT in human CD4+ and CD8+ T-lymphocytes

“…Выделение РНК и оценку уровней экспрессии EndoG и сплайс-вариантов hTERT, вестерн-блоттинг и анализ активности теломеразы методом TRAP (Telomeric Repeat Amplification Protocol) осуществляли по описанным ранее протоколам [8].…”

“…Ранее мы показали, что апоптотическая экдонуклеаза EndoG участвует в регуляции АС мРНК hTERT [5], а сверхэкспрессия EndoG в опухолевых клетках вызывает понижение экспрессии полноразмерного a+b+ и увеличение экспрессии a+bсплайс-варианта [6]. Известно, что экспрессия EndoG увеличивается в ответ на повреждения ДНК [7,8]. Повышенная экспрессия EndoG, индуцированная повреждающим ДНК агентом цисплатином, в нормальных CD4 + Т-лимфоцитах человека вызывает изменение пропорции сплайс-вариантов hTERT, ингибирование активности теломеразы, укорочение теломер, переходу клеток в состояние репликативного старения и их гибель по пути апоптоза [8].…”

“…Известно, что экспрессия EndoG увеличивается в ответ на повреждения ДНК [7,8]. Повышенная экспрессия EndoG, индуцированная повреждающим ДНК агентом цисплатином, в нормальных CD4 + Т-лимфоцитах человека вызывает изменение пропорции сплайс-вариантов hTERT, ингибирование активности теломеразы, укорочение теломер, переходу клеток в состояние репликативного старения и их гибель по пути апоптоза [8]. В данной работе мы проверили способность повреждающих ДНК агентов с различным механизмом действия индуцировать экспрессию EndoG и вызывать АС hTERT и ингибирование активности теломеразы в нормальных активированных CD4 + и CD8 + T-лимфоцитах человека.…”