cis-Preferential requirement of a − 1 frameshift product p88 for the replication of Red clover necrotic mosaic virus RNA1

Abstract

The genome of Red clover necrotic mosaic virus (RCNMV) consists of RNA1 and RNA2. RNA1 encodes N-terminally overlapping replication proteins, p27 and p88, which are translated in a cap-independent manner. The 3' untranslated region of RNA1 contains RNA elements essential for cap-independent translation and negative-strand RNA synthesis. In this study, we investigated how p27 and p88 were engaged in the replication of RCNMV genomic RNAs by using DNA vectors or in vitro transcribed RNAs in protoplasts and in a cell-free extract of evacuolated BY-2 protoplasts. Our results show a cis-preferential requirement of p88, but not of p27, for the replication of RNA1. This mechanism might help to facilitate a switch in the role of RNA1 from mRNA to a replication template.

Análisis Funcional De Proteínas Codificadas Por El Virus De La Rotura Del Color De La Flor Del Pelargonium

“…These results are in agreement with those reported for other members of the family Tombusviridae which show that, besides the RdRp, the corresponding virus produces an additional, relatively small polypeptide that is indispensable for effective pathogen multiplication. The lack of complementation among p27stop and p27tyr mutants, which are impaired in p86 and p27 synthesis, respectively, suggests either a cis-preferential requirement for both viral replicase proteins and/or a coupling between translation and replication, as proposed for several members of the Tombusviridae [Okamoto et al, 2008;Oster et al, 1998;White et al, 1995] and also other viral families [e.g. Lewandowski & Dawson, 2000;Neeleman & Bol, 1999].…”

“…Lewandowski & Dawson, 2000;Neeleman & Bol, 1999]. It should nevertheless be noted that, within the family Tombusviridae, only the RdRp functioned in a cis-preferential manner in the case of Red clover necrotic mosaic virus (genus Dianthovirus) [Okamoto et al, 2008], whereas the opposite situation (i.e. cis-preferential functioning of ORF1 product) was reported for TCV and Tomato bushy stunt virus (TBSV; genus Tombusvirus) [Oster et al, 1998;White et al, 1995].…”

“…La información disponible actualmente acerca de las replicasas de los miembros de la familia Tombusviridae se ha obtenido fundamentalmente a partir de los trabajos realizados con varios miembros del género Tombusvirus [Bleve-Zacheo et al, 1997;Oster et al, 1998;Rubino et al, 2001;Weber-Lotfi et al, 2002;Panaviene et al, 2003;Navarro et al, 2004;Panavas et al, 2005a;] y con una especie del género Dianthovirus [Bates et al, 1995;Turner et al, 2004;Takeda et al, 2005;Okamoto et al, 2008;Mine et al, 2010b]. Estas investigaciones se han centrado en los requerimientos de secuencias y las actividades enzimáticas de la RdRp, en las propiedades de unión a ácidos nucleicos de ambas replicasas, su localización subcelular, la búsqueda de factores del huésped implicados en la replicación y en la interacción entre ambas proteínas.…”

“…Este aspecto se ha confirmado también en otros componentes de la familia, como el virus del mosaico necrótico del trébol rojo (Red clover necrotic ringspot virus, RCNMV) (género Dianthovirus) [Bates et al, 1995;Takeda et al, 2005;Okamoto et al, 2008], el virus del mosaico del Panicum (Panicum mosaic virus, PMV) (género Panicovirus) [Batten et al, 2006], la cepa D del virus de la necrosis del tabaco (Tobacco necrosis virus D, TNV-D) (género Necrovirus) [Molnár et al, 1997], en dos carmovirus, el virus del arrugamiento del nabo (Turnip crinkle virus, TCV) y el virus de las manchas necróticas del melón (Melon necrotic spot virus, MNSV) [Hacker et al, 1992;White et al, 1995;Genovés et al, 2006], y en el virus del arabesco del Pelargonium (Pelargonium line pattern virus, PLPV), propuesto como miembro de un nuevo género, Pelarspovirus, dentro de la familia Tombusviridae [Castaño et al, 2009].…”

“…Estos resultados son similares a los obtenidos con otros miembros del género Carmovirus [Hacker et al, 1992;White et al, 1995;Genovés et al, 2006] y con otras especies de la familia Tombusviridae Kollár & Burgyán, 1994;Bates et al, 1995;Scholthof et al, 1995b;Molnár et al, 1997;Molinari et al, 1998;Oster et al, 1998;Panaviene et al, 2003;Takeda et al, 2005;Batten et al, 2006;Okamoto et al, 2008], que muestran que en la replicación intervienen como mínimo dos proteínas virales: la RdRp, y un polipéptido adicional de menor tamaño con funciones auxiliares al proceso de síntesis de RNA. La RdRp es la enzima encargada de generar los intermediarios replicativos y, en última instancia, los genomas de la progenie viral, mientras que la falta de motivos reconocibles en la replicasa más pequeña impide anticipar sus funciones concretas.…”