Chronic granulomatous disease. Diagnosis by the dihydrorhodamine assay

Abstract

Introducción: La enfermedad granulomatosa crónica (EGC) se caracteriza por una alteración de la función oxidativa de neutrófilos, presentando herencia ligada al cromosoma X (EGC-LX) y autosómica recesiva (EGC-AR). El ensayo de dihidrorodamina (DHR) es utilizado para el diagnóstico y detección de portadoras, además proporciona información sobre patrones de herencia.Objetivo: Detectar casos de EGC en niños con infecciones recurrentes y evaluar a sus familiares femeninas mediante el ensayo de DHR, para identificar portadoras y obtener información acerca de posibles patrones de herencia.Pacientes y Método: Fueron incluidos 107 pacientes (<18 años de edad) con sospecha clínica de EGC como neumonías, linfadenopatías y abscesos, remitidos por médicos de hospitales públicos, del 2014 al 2017. Además, se incluyeron seis mujeres, familiares de los niños con EGC. A las muestras de los pacientes se aplicó el ensayo DHR, expresando los resultados como índice de estimulación de neutrófilos (IE).Resultados: La mediana de edad de los pacientes fue de 3 años y 62/107 fueron varones. El IE promedio fue 39.7±13.8 y 101/107 niños exhibieron un cambio completo de fluorescencia de DHR. En 2/107 niños no se observó dicho cambio (IE=1.0), lo cual indica posible EGC-LX, y un tercer niño mostró un leve cambio (IE=4.8), compatible con EGC-AR. En 5/6 mujeres se encontró un patrón bimodal, indicando un estado de portadora.Conclusiones: Fueron detectados tres casos de EGC y cinco portadoras mediante el ensayo de DHR, realizado por primera vez en Paraguay. También se obtuvo información sobre los posibles patrones de herencia, EGC-LX en dos familias y un caso probable de EGC-AR.

Carrier State of Chronic Granulomatous Disease Presented at Middle Age: A Case Report

“…Chronic granulomatous disease used to be diagnosed by the NBT test, but as this test is prone to subjectivity, it has been replaced by DHR as the best current diagnostic tool. Dihydrorhodamine also provides information about the most likely inheritance pattern of CGD (6). In the carrier state of CGD, a causal relationship exists between skewed inactivation of the wild-type allele and the risk of infection, with the risk being dose-dependent on the DHR value percentage (3).…”

Chronic Granulomatous Disease (CGD): Commonly Associated Pathogens, Diagnosis and Treatment

“…The reduction of cytochrome C results in the formation of distinct bands in the absorption spectrum and the increase in absorbance at 550 nm is measured with time [ 50 , 51 ], (c) Nitroblue tetrazolium (NBT) reduction test—The nitroblue tetrazolium reduction test (NBT) is an assay based on the activation percentage of neutrophils in peripheral blood. It has been used to study the follow-up of microbial agents owing to the narrow relationship between the molecules involved in the oxidative burst and the organisms e.g., Leishmania activity in phagocytes [ 51 , 52 , 53 , 54 , 55 , 56 , 57 ], (d) Dihydrorhodamine (DHR) 123 Oxidation test—White blood cells are incubated with dihydrorhodamine 123 (DHR) and catalase, then stimulated with Phorbol 12-Myristate 13-Acetate (PMA). Dihydrorhodamine oxidation to rhodamine by the respiratory burst of the cell is measured by flow cytometry [ 53 , 58 ] and (e) Chemiluminescence [ 58 , 59 ].…”