Cezayir Çiftliklerinde Sığırlardaki Cryptosporidium Prevalansı ve Moleküler Karakterizasyonu

Abstract

Faecal samples were collected from 338 less than 03 month-old dairy calves from 34 cattle herds located in three regions of northeastern Algeria in order to characterize Cryptosporidium oocyst output using Ziehl-Neelsen, Heine and immunofluorescence methods and to identify different species of Cryptosporidium using a PCR 18S. Faecal samples were processed, firstly, through concentration and modified Ziehl-Neelsen staining techniques. Then, 93 faecal samples (not concentrated) were randomly selected and analyzed with the Heine staining technique. Positives samples revealed by both methods, Heine and Ziehl-Neelsen, were analyzed by direct immunofluorescent antibody test and by PCR 18S. Twenty-three herds out of thirty four (68%) were found positive and 108 (32%) calves were shedding oocysts. The prevalence of excretion peaked when calves were 15-30 days of age. However, it was found that the majority of infected calves were coupled to diarrhoea in 1-14 day old calves. Moreover, calves aged 1-14 days showed a higher level of oocyst shedding with OPG equal to 5.2×104. Three species were identified by sequencing of the 18S PCR products; Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium bovis and Cryptosporidium andersoni. These results represent the first report on the genetic identification of Cryptosporidium species in dairy cattle in Algeria and confirm the frequent occurrence of Cryptosporidium in diarrhoeic calves. Keywords: Cryptosporidium, PCR 18S, calves, Algeria Cezayir Çiftliklerinde Sığırlardaki Cryptosporidium Prevalansı ve Moleküler Karakterizasyonu ÖzetKuzey-doğu Cezayir'de 3 farklı bölgedeki 34 sığır çiftliğinden toplam 338 adet 3 aylıktan daha küçük buzağıya ait dışkı örnekleri Ziehl-Neelsen, Heine ve immunfloresan yöntemleri kullanılarak Cryptosporidium oositlerini karakterize etmek ve 18S PCR ile farklı türlerini belirlemek amacıyla toplandı. Dışkı örnekleri konsantrasyon ve sonrasında modifiye Ziehl-Neelsen yöntemi ile işlendi. Takibinde, 93 dışkı örneği (konsantre edilmemiş) kör olarak seçildi ve Heine boyama tekniği ile analiz edildi. Heine ve Ziehl-Neelsen tekniklerinin her ikisiyle birlikte pozitif bulunan örnekler direkt immunfloresan ve 18S PCR ile analiz edildi. Otuz dört çiftlikten 23'ü (%68) pozitif olarak belirlenirken 108 (%32) buzağının oosit yaydığı tespit edildi. Oosit yayma oranı buzağılar 15-30 günlükken en yüksek seviyedeydi. Ancak enfekte buzağıların çoğunun 1-14 günlükken ishalli oldukları belirlendi. 1-14 günlük buzağılar her bir gram dışkı örneğinde 5.2×104 oosit ile daha yüksek seviyede oosit yayma oranı gösterdiler. 18S PCR ile Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium bovis ve Cryptosporidium andersoni olmak üzere üç tür belirlendi. Bu çalışma ile Cezayir'de sütçü sığırlarda Cryptosporidium türlerinin ilk defa genetik identifikasyonu yapılarak ishalli buzağılardaki bulunma sıklığı tespit edildi.