Caracterización del perfil de sensibilidad de un panel de líneas celulares para valoración de citotoxicidad in vitro.

Abstract

Introducción. La valoración de la citotoxicidad in vitro de líneas celulares derivadas de tumores humanos se emplea como bioensayo preliminar para el tamizaje de productos de origen natural con potencial actividad anticancerígena. Objetivo. Fortalecer el modelo de valoración de citotoxicidad in vitro disponible en el laboratorio, ampliando el panel de líneas celulares y caracterizando su perfil de sensibilidad a los fármacos antineoplásicos. Materiales y métodos. Se adicionaron al panel las líneas celulares HeLa, MKN-45 y U-937, y se evaluó la sensibilidad de las siete líneas celulares (HEp-2, HT-29, MCF-7, SiHa, MKN-45, HeLa y U-937) a los fármacos antineoplásicos doxorrubicina HCl, taxol, cisplatino, ciclofosfamida y carmustina, usados en la terapia antineoplásica. Para la valoración de la citotoxicidad se empleó el método de reducción del metil-tiazol-tetrazolio. Resultados. Al comparar las concentraciones letales 50 (CL 50 ) calculadas, se evidenció una sensibilidad diferencial de las líneas celulares frente a doxorrubicina HCl, taxol y cisplatino, siendo HEp-2 la línea más sensible a todos los fármacos, en tanto que las HeLa y U-937 fueron las más resistentes. La respuesta de HEp-2 frente al taxol presentó un comportamiento bifásico, relacionado con su mecanismo de acción. Conclusión. En las condiciones empleadas no se observaron efectos frente a la ciclofosfamida y la carmustina.Palabras clave: ensayos de selección de medicamentos antitumorales, agentes antineoplásicos, línea celular. Sensitivity profile of a panel of cell lines designed for the evaluation of in vitro cytotoxicityIntroduction. Preliminary in vitro cytoxicity evaluations are determined in human tumor cell lines as a bioassay for the screening of potentially anticancer natural products. Objective. To strengthen the available in vitro cytotoxicity evaluation models, the panel of cell lines was expanded, and the sensitivity profile of each cell line was evaluated for its response to selected antineoplasic drugs. Materials and Methods. HeLa, MKN-45 and U-937 cell lines were added to the panel, and the sensitivity was determined for each of seven cell lines: HEp-2, HT-29, MCF-7, SiHa, MKN-45, HeLa and U-937.The effects of the antineoplasic drugs Doxorubicin HCl, Taxol, Cisplatin, Cyclophosphamide and Carmustin were examined, using the methyl thiazol tetrazolium (MTT) reduction assay. Results. A differential sensitivity to the drugs Doxorubicin HCl, Taxol and Cisplatin was established among the cell lines by comparing the lethal concentration 50 (LC50) values. HEp-2 was the most sensitive cell line, whereas HeLa and U-937 were the most resistant. HEp-2 exhibited a biphasic response to Taxol treatment; this was related to the reported mechanism of action of this compound. Conclusion. Cyclophosphamide and Carmustin did not show activity under test conditions.

Efecto citotóxico de algunos compuestos naturales aislados de plantas Laureaceae y derivados sintéticos

“…After adjusting the cell densities established by us in previous studies (28)(29)(30)(31)(32), cells were seeded into 96-well plates, incubated for 24 hours in standard conditions to allow cell adhesion to the well surface, and after this time, test compounds 1-20 were placed as treatments (at three concentrations: 6, 18 and 54 μg/ml, using three replicates per concentration) and doxorrubicin HCl (Ebewe Pharma®) as positive control, by up to a volume of 100 μl per well, obtained by serial dilution in MEM supplemented with 5% FBS (28). After 48 hours of treatment, the viable cell population on the plates was determined using 100 μl of rezasurin (0.25 mg/ml in PBS), which was placed in each well with medium without supplement to avoid interferences during test.…”

Fluorometric Assay for Cell Proliferation in Human Tumor Cell Lines Application

“…Se emplearon las densidades celulares establecidas en trabajos previos del laboratorio con el método de reducción de MTT (21)(22)(23). Para MCF-7: 15000 células/pozo, MKN-45: 15000 células/pozo, SiHa: 10000 células/pozo, HEp-2: 7500 células/pozo, HT-29: 15000 células/pozo y HeLa: 10000 células/pozo, en un volumen de 100 μL por pozo.…”

“…En el segundo bloque, las líneas MKN-45, SiHa y MCF-7 fueron cultivadas en otras dos placas de 96 pozos y de igual manera; una leída con el método de tinción SRB y otra con resazurina. Como tratamiento se empleó doxorubicina HCl (Ebewe Pharma ® ) en concentraciones de 10 μM, 1 μM y 0,1 μM, obtenidas por dilución seriada en MEM suplementado con 5% de SFB (21). Después de un tratamiento de 48 horas, se determinó la población celular viable en las placas empleando los diferentes métodos.…”

“…Sobre el panel de líneas evaluadas, SiHa y HEp-2 mostraron ser más sensibles a este fármaco antineoplásico en las concentraciones del medicamento evaluado, lo que concuerda con lo reportado por otros autores (21).…”

Efecto citotóxico del extracto metanólico de tres ecotipos de Lepidium peruvianum Chacón sobre líneas celulares HeLa y HT-29

“…La evaluación de la citotoxicidad in vitro sigue siendo una herramienta válida y útil en las primeras etapas de selección de compuestos promisorios (León et al, 2006 El objetivo fue determinar la actividad citotóxica de los extractos metanólicos (EM) de los ecotipos negro, morado y amarillo de L. peruvianum empleando las líneas celulares HeLa (Human Epithelial Carcinoma) y HT-29 (Human Colon Adenocarcinoma).…”