Caracterização cinética de uma ATP-difosfohidrolase em membranas de placa óssea de rato livres de fosfatase alcalina

Abstract

Adenosina 5'-trifosfato Adenosina 5'-difosfato Adenosina 5'-monofosfato Adenosina 5'-trifosfatase Adenosina 5'-difosfatase P',P5( Adenosina 5')-pentafosfato Bis-p-nitrofenilfosfato Citosina 5'-trifosfato Citosina 5'-difosfato Citosina 5'-monofosfato Dimetil sulfóxido Ácido etilenodiamina tetracético Guanosina 5'-trifosfato v do ATP e ADP é reduzida cerca de 30% e 40%, respectivamente, na presença de suramina 1 mM, um antagonista do receptor de purina P2.Na ausência de íons magnésio ou cálcio, a hidrólise do ATP e ADP é desprezível enquanto na presença de íons cálcio ou magnésio a estimulação da atividade da enzima por tais íons é similar e cada íon pode substituir o outro durante o ciclo catalítico da enzima.A hidrólise do ATP e ADP diminuiu consideravelmente na presença de Polidocanol 1%, Lubrol WX 1,35%, Lubrol PX 1%, CHAPS 2,5%, CiiEs 1%, Triton X-114 1%, Triton X-100 0,2%, n-octil-P-D-glicosídeo 30 mM, polioxietileno-5-decil éter 0,5%. Os resultados mais promissores foram obtidos com a adição conjunta de digitonina e dimiristoil L-oc-fosfatidilcolina (DMPC). Dentre todos os detergentes utilizados, a digitonina, na proporção de 5:1 (mg/mL) foi mais eficaz na solubilização.A ATPase existente na membrana de placa óssea de rato e livre de fosfatase alcalina pode ser considerada uma ATP-difosfohidrolase por apresentar especificidade para nucleotídeos di e tnfosfatos; não hidrolisar nucleotídeos monofosfato e fosfomonoésteres não nucleotídeos; ser ativada por íons cálcio ou magnésio; não ser inibida pelos inibidores de V-, Ca2+-, H+-, e Na+ ou K-ATPases; ser inibida por altas concentrações de azida de sódio; apresentar a mesma faixa de pH para NTF e NDF; ser facilmente inativada por detergentes; apresentar valores similares de Km (100 pM) para 0 ATP e ADP.