Capacidad de Dos Líneas Celulares para la Producción de Embriones Clonados mediante Transferencia Nuclear de Células Somáticas

Abstract

RESUMENEn este estudio se demuestra el uso de la transferencia nuclear de células somáticas para producir los primeros bovinos clonados en el Perú. Se obtuvieron fibroblastos de piel y células de cúmulos de donantes adultos para ser usados como carioplastos; asimismo, ovocitos obtenidos a partir de ovarios de camal fueron madurados in vitro por 24 h. Los ovocitos madurados se incubaron 2 h en demecolcina (2.5 µg/ml) para promover la formación del cono con el plato metafásico y para orientar la enucleación manual. Se eliminó la zona pelúcida en pronasa (2 mg/ml) por 3 min. La enucleación fue manual con una microcuchilla dividiendo el óvulo en dos mitades, donde las mitades carentes de núcleo fueron fusionadas por el método «sandwich» (citoplasto-fibroblasto-citoplasto) por electrofusión. Las estructuras reconstruidas se activaron químicamente mediante incubación por 5 min en 7% de etanol absoluto, seguido por 5 h de citocalacina B (5µg/ml) y cicloheximida (10 µg/ml). Las estructuras se cultivaron durante 7 d hasta la fase de incubación/eclosión de blastocisto. Siete blastocistos fueron transferidos a seis vacas receptoras sincronizadas siete días después de la ovulación. Se logró la permanencia de cuatro y tres vesículas embrionarias hasta los días 28 y 60, respectivamente. Dos terneras llegaron a nacer a partir de embriones reconstruidos con células de piel y con células de cúmulos. Mediante el análisis de genotipos, utilizando 15 marcadores (SSR) para bovinos, se confirmó que los terneros clonados fueron derivados de las líneas celulares de las donantes.Palabras clave: reproducción asistida; bovino; clonación; transferencia nuclear de cé-lulas somáticas; clonación hecha a mano

Alteraciones histológicas asociadas a la muerte de un ternero clonado en una ganadería mexicana productora de ganado de lidia

“…La capacidad de las células de fundirse con el citoplasto receptor y luego ser reprogramadas, depende de la línea celular utilizada como donante de núcleo. Los fibroblastos de piel y células del cúmulo pueden cultivarse, expandirse y congelarse sin perder su capacidad de soportar el desarrollo de embriones por TNCS [7].…”

Generación de embriones interespecie clonados a partir de fibroblastos de piel de bovino

“…Lu, et al (2005), Roa (2006) y Liu et al (2011, señalan que mediante la TNCS diversos grupos de investigación han logrado el nacimiento de 23 especies de mamíferos: oveja (Wilmut et al, 1997), ratón (Wakayama et al, 1998), bovinos Kato et al, 1998), cerdo (Polejaeva et al, 2000, conejo (Chesne, et al, 2002) equino (Galli et al, 2003), gato (Shin et al, 2002, rata (Zhou et al, 2003), perro (Lee et al, 2005, y anfibios (Tecirlioglu et al, 2006). Paralelo a este proceso, diversos investigadores desarrollaron la TNCS para la producción de embriones, partiendo de diferentes tipos de células, entre ellas, los fibroblastos (Keefer et al, 2001) y las células de la granulosa (Wells et al, 1999;Cortez et al, 2017).…”