Brazilian isolates of Trypanosoma cruzi from humans and triatomines classified into two lineages using mini-exon and ribosomal RNA sequences.

Fernandes, Octávio; Souto, Ricardo Peres do; Castro, Jose; Pereira, João Baptista Borges; Fernandes, Natália Coelho Couto de Azevedo; Junqueira, Angela C. V.; Naiff, R. D.; Barrett, Toby Vincent; Degrave, Wim; Zingales, Bianca; Campbell, David A.; Coura, José Rodrigues

doi:10.4269/ajtmh.1998.58.807

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“…Therefore, previous studies have shown how difficult it is to distinguish the role of each DTU in the disease. DTUs may be under-reported from domiciliary and sylvatic transmission cycles because some genotyping methodologies fail to distinguish between TcIV (TcIIa) and TcIII 73 . TcIII was identified in patients with chronic ChD from Minas Gerais State 32 and in patients with the indeterminate form of ChD from Rio Grande do Norte State 69 .…”

Section: Discussionmentioning

confidence: 99%

Combined parasitological and molecular-based diagnostic tools improve the detection of Trypanosoma cruzi in single peripheral blood samples from patients with Chagas disease

Volpato

Sousa

D’Ávila

et al. 2017

Rev. Soc. Bras. Med. Trop.

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Introduction:In order to detect Trypanosoma cruzi and determine the genetic profiles of the parasite during the chronic phase of Chagas disease (ChD), parasitological and molecular diagnostic methods were used to assess the blood of 91 patients without specific prior treatment. Methods: Blood samples were collected from 68 patients with cardiac ChD and 23 patients with an indeterminate form of ChD, followed by evaluation using blood culture and polymerase chain reaction. T. cruzi isolates were genotyped using three different genetic markers. Results: Blood culture was positive in 54.9% of all patients, among which 60.3% had the cardiac form of ChD, and 39.1% the indeterminate form of ChD. There were no significant differences in blood culture positivity among patients with cardiac and indeterminate forms. Additionally, patient age and clinical forms did not influence blood culture results. Polymerase chain reaction (PCR) was positive in 98.9% of patients, although comparisons between blood culture and PCR results showed that the two techniques did not agree. Forty-two T. cruzi stocks were isolated, and TcII was detected in 95.2% of isolates. Additionally, one isolate corresponded to TcIII or TcIV, and another corresponded to TcV or TcVI. Conclusions: Blood culture and PCR were both effective for identifying T. cruzi using a single blood sample, and their association did not improve parasite detection. However, we were not able to establish an association between the clinical form of ChD and the genetic profile of the parasite.

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Section: Discussionmentioning

confidence: 99%

Combined parasitological and molecular-based diagnostic tools improve the detection of Trypanosoma cruzi in single peripheral blood samples from patients with Chagas disease

Volpato

Sousa

D’Ávila

et al. 2017

Rev. Soc. Bras. Med. Trop.

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“…Para amplificar dicha región se utilizaron los iniciadores TC1 (5´-GTGTCCGCCACCT-CCT-TCGGGCC-3´), TC2 (5´-CCTGCAGGCACAC-GTGTGTGTG-3´) y TCC (5´-CCCCCCTCCCAG-GCCACACTG-3´), los cuales amplifican un fragmento de 350 pb para el grupo T. cruzi I y un fragmento de 300 pb para el grupo T. cruzi II (13 Para determinar si los clones aislados eran genéticamente diferentes se utilizó la técnica PCR de baja astringencia con un único iniciador específico (LSSP-PCR), que requiere un primer paso de amplificación de la región variable del ADN del cinetoplasto (kADN). Para amplificar dicha región se utilizaron los iniciadores S35 (5´-AAATAATGTACGGGGAGATGCATGA-3´) y S36 (5´-GGGTTCGATTGGGGTTGGTGT-3´), los cuales amplifican un fragmento de 330 pb correspondiente a la región variable de los minicírculos (24).…”

Section: Extracción De Adn Y Caracterización Genética De Los Clones Eunclassified

“…En T. cruzi se han utilizado diferentes marcadores bioquímicos y moleculares para tratar de correlacionar la diversidad genética del parásito con sus características biológicas. El uso del espaciador intergénico de los genes mini-exón genera dos claras divisiones filogenéticas conocidas como T. cruzi I y T. cruzi II (12), las cuales permiten establecer algunas asociaciones importantes entre la taxonomía y la biología del parásito, el desarrollo de la enfermedad y diferentes parámetros epidemiológicos, entre otros (13,14).…”

unclassified

“…Por otra parte, se ha visto que áreas con gran morbilidad presentan la circulación del grupo T. cruzi II, mientras que en donde circula el grupo T. cruzi I es poco frecuente la enfermedad (7). Sin embargo, estudios recientes muestran que los dos grupos están circulando en ambos ambientes (13)(14)(15)(16); en Venezuela, por ejemplo, un estudio realizado durante el año 2004 reveló un mayor número de pacientes infectados con el grupo T. cruzi I que presentaban la fase aguda de la enfermedad con manifestaciones clínicas similares a las observadas en pacientes infectados con el grupo T. cruzi II (16). Así mismo, en infecciones experimentales se ha encontrado que el grupo al que pertenecen los parásitos determina el tropismo a tejidos, la parasitemia y la patogénesis de la enfermedad (1,7,17).…”

unclassified

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Caracterización biológica y genética de dos clones pertenecientes a los grupos I y II de Trypanosoma cruzi de Colombia

Botero¹,

Mejía²,

Triana³

2007

biomedica

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Introducción. T. cruzi I y T. cruzi II son grupos genéticamente diferentes y se cree que dicha variabilidad es determinante del tropismo tisular en el hospedero vertebrado y responsable de las diversas manifestaciones clínicas de la enfermedad de Chagas. Objetivo. Caracterizar biológica y genéticamente dos clones colombianos de los grupos T. cruzi I y II en el modelo murino. Materiales y métodos. Las cepas CAS15 y AF1 pertenecientes a los grupos T. cruzi I y II fueron clonadas en medio semisólido. Un clon de cada una de ellas y una mezcla de ambos se utilizaron para infectar ratones, los cuales se sacrificaron a diferentes tiempos post-infección. Para analizar la presencia del parásito en sangre y diferentes órganos, se utilizaron el microhematocrito y la reacción en cadena de la polimerasa con los marcadores de la secuencia satélite del ADN nuclear y con el espaciador intergénico del gen mini-exón. Resultados. El clon T. cruzi I fue más infectivo, observándose un tropismo preferencial por corazón, recto y músculo esquelético, mientras que el clon T. cruzi II presentó un tropismo preferencial por bazo e hígado. Durante la infección con la mezcla de los clones, se observó que el clon T. cruzi I predominó sobre el T. cruzi II tanto en sangre como en órganos. Conclusiones. Los resultados confirman que las diferencias genéticas entre los grupos de T. cruzi podrían estar determinando el tropismo tisular y de esta manera jugar un papel fundamental en el entendimiento de las manifestaciones clínicas de la enfermedad de Chagas en Colombia.Palabras claves: Trypanosoma cruzi, enfermedad de Chagas, variación (Genética), tropismo. Biological and genetic characterization of two Colombian clones of Trypanosoma cruzi groups I and IIIntroduction. Genetic differences between T. cruzi I and T. cruzi II may determine differences in their tissue tropism in the vertebrate host and may also be responsible for the differences in clinical manifestations of Chagas disease. Objective. Two Colombian clones of the T. cruzi groups I and II were characterized biologically and genetically in a murine model. Materials and methods. Strains Cas15 and AF1 belonging to the T. cruzi groups I and II were cloned in semisolid medium. A clone of each strain and a mix of both were used to infect mice; the mice were subsequently sacrificed at selected post-infection intervals. In order to identify the parasite presence in blood and organs, two methods were used (a) microhematocrit and (b) polymerase chain reaction with primers for satellite DNA and the intergenic region of miniexon. Results. The T. cruzi I clone was more infectious, with a preferential tropism observed in heart, rectum and skeletal muscle, whereas clone T. cruzi II exhibited a preferential tropism for spleen and liver. During the infection with the clone mixture a predominance of the T. cruzi I clone over clone II in blood as well as in organs was observed. Conclusion. The results corroborate that the genetic differences between the T. cruzi groups correlate with their tissue tropism, an...

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“…Para amplificar el kADN se utilizaron los oligos S35 (5 -AAATAATGTACGGGGAGATGCATGA-3 ) y S36 (5 -GGGTTCGATTGGGGTTGGTGT-3 ), los cuales amplifican un fragmento de 330 pb correspondiente a la región variable de los minicírculos (29 Para amplificar el espaciador intergénico de los genes miniexón, se hizo una PCR múltiple, utilizando los oligos TC1 (5 -GTGTCCGCCACCT-CCT-TCGGGCC-3 ), TC2 (5 -CCTGCAGGCACAC-GTGTGTGTG-3 ) y TCC (5 -CCCCCCTCCCAG-GCCACACTG-3 ), los cuales amplifican un fragmento de 300 pb para el grupo T. cruzi II y un fragmento de 350 pb para el grupo T. cruzi I (30). La PCR se hizo en un volumen final de 25 µl que contenían 2,5 µl de ADN molde, 50 mM KCl, 10 mM Tris-HCl, 0,1% Tritón X-100, 1,5 mM MgCl 2, 12,5 pmol de cada iniciador, 200 mM dNTPs y 0,625 unidades de Taq polimerasa (Fermentas).…”

Section: Detección Del Parásito Por Pcrunclassified

Análisis por LSSP-PCR de la variabilidad genética de Trypanosoma cruzi en sangre y órganos de ratones.

Mejía

Triana

2005

biomedica

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Introducción. La enfermedad de Chagas, causada por Trypanosoma cruzi, presenta un curso clínico variable que oscila desde casos asintomáticos a casos crónicos. T. cruzi tiene una estructura clonal y las cepas infectivas son a menudo multiclonales. La variabilidad genética de T. cruzi puede ser un determinante para el tropismo diferencial a tejidos y, consecuentemente, para las formas clínicas de la enfermedad. Objetivo. Caracterizar genéticamente los parásitos de sangre y órganos de ratones infectados con dos cepas colombianas de T. cruzi. Materiales y métodos. Se infectaron ratones con dos cepas colombianas de T. cruzi con el fin de determinar la infección en sangre y órganos. Para esto, se evaluó la sensibilidad de tres marcadores moleculares diferentes, y se determinó la variabilidad genética de los clones por la técnica de reacción en cadena de la polimerasa de baja astringencia con un único iniciador específico (LSSP-PCR), utilizando el marcador del ADN del cinetoplasto (kADN). Los perfiles de bandas obtenidos con la LSSP-PCR se analizaron por el método de neighbor-joining. Resultados y conclusiones. Nuestros resultados confirmaron la presencia de los dos grupos de T. cruzi en las cepas y el carácter policlonal de éstas. El marcador más sensible fue el kADN y el órgano más afectado, el corazón. Se encontraron diferencias genéticas entre los clones presentes en la sangre y los órganos de los ratones infectados. En conclusión, estos resultados apoyan el uso de la LSSP-PCR para el entendimiento de la epidemiología de la enfermedad de Chagas. Palabras clave: Trypanosoma cruzi, variación genética, LSSP-PCR, ADN del cinetoplasto, Enfermedad de ChagaGenetic variability of Trypanosoma cruzi in blood and organs of infected mice determined by LSSP-PCR Background. Chagas disease, caused by Trypanosoma cruzi, has a variable clinical course, ranging from asymptomatic infection to chronic disease. Trypanosoma cruzi has a clonal population structure, although infecting strains are often multiclonal. Genetic variability of T. cruzi may be one of the determinant factors in differential tissue tropism and consequently of the clinical forms of the disease. Objective. To examine this possibility, mice were infected with two Colombian T. cruzi strains to determine the distribution of genetic variants in blood and organs. The sensitivity of three molecular markers was evaluated, and the genetic variability of the clones was determined. The latter was attained by means of low-stringency single specific primer polymerase chain reaction (LSSP-PCR) using a kinetoplast DNA (kDNA) marker. The kDNA signatures obtained with the LSSP-PCR were analyzed by neighbor-joining. Results and conclusion. The presence of the two lineages of T. cruzi was confirmed, as well as the multiclonal character of the two strains. The most sensitive marker was the kDNA. The most affected organ was the heart, which showed the greatest number of positive results with the three markers. Genetic differences were noted between the clones from the blood and organs...

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Brazilian isolates of Trypanosoma cruzi from humans and triatomines classified into two lineages using mini-exon and ribosomal RNA sequences.

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Combined parasitological and molecular-based diagnostic tools improve the detection of Trypanosoma cruzi in single peripheral blood samples from patients with Chagas disease

Combined parasitological and molecular-based diagnostic tools improve the detection of Trypanosoma cruzi in single peripheral blood samples from patients with Chagas disease

Caracterización biológica y genética de dos clones pertenecientes a los grupos I y II de Trypanosoma cruzi de Colombia

Análisis por LSSP-PCR de la variabilidad genética de Trypanosoma cruzi en sangre y órganos de ratones.

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