BmVDAC upregulation in the midgut of Rhipicephalus microplus, during infection with Babesia bigemina

Rodríguez-Hernández, Elba; Mosqueda, Juan; León-Ávila, Gloria; Castañeda-Ortiz, Elizabeth J.; Álvarez-Sánchez, María Elizbeth; Camacho, Alejandro D.; Ramos, Alberto R.; Camacho-Nuez, Minerva

doi:10.1016/j.vetpar.2015.06.016

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“…Fourteen days later, the calf was intravenously inoculated with 5 ml of blood infected with B. bigemina (Chiapas strain) previously maintained in liquid nitrogen and 21 days later replete female ticks were collected. Replete female ticks fed on infected or uninfected blood were collected a part of the ticks used to obtain total extracts for RNA and also to obtain their midguts at 0, and 72 h post-repletion as previously reported [ 20 ]. To confirm infection, hemolymph smears were examined from 30 females, 72 h post-repletion [ 21 ].…”

Section: Methodsmentioning

confidence: 99%

“…The midguts from infected or uninfected ticks of replete females were obtained as we reported previously [ 20 ]. Proteins were isolated from midgut using TNTE (50 mM Tris pH 7.4, 150 Mm NaCl, 0.5% Triton and 1 Mm EDTA) as we described before [ 16 ].…”

Section: Methodsmentioning

confidence: 99%

“…The peptides were suspended in sterile phosphate buffered saline (PBS) to a final concentration of 100 μg per 500 μl of PBS. Each solution was mixed with 500 μl of Montanide ISA 71 VG (Seppic, Paris, France) as an adjuvant, as it was used before [ 20 ]. The mixture of each peptide was emulsified and kept at 4 °C until used on the same day.…”

Section: Methodsmentioning

confidence: 99%

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Hap2, a novel gene in Babesia bigemina is expressed in tick stages, and specific antibodies block zygote formation

et al. 2017

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BackgroundBovine babesiosis is a tick-borne disease caused by the protozoan parasites of the genus Babesia. In their host vector, Babesia spp. undergo sexual reproduction. Therefore, the development of sexual stages and the subsequent formation of the zygote are essential for the parasite to invade the intestinal cells of the vector tick and continue its life-cycle. HAP2/GCS1 is a protein identified in plants, protozoan parasites and other organisms that has an important role during membrane fusion in fertilization processes. The identification and characterization of HAP-2 protein in Babesia would be very significant to understand the biology of the parasite and to develop a transmission-blocking vaccine in the future.ResultsTo isolate and sequence the hap2 gene DNA from an infected bovine with Babesia bigemina was purified. The hap2 gene was amplified, cloned and sequenced. The sequences of hap2 from four geographically different strains showed high conservation at the amino acid level, including the typical structure with a signal peptide and the HAP2/GSC domain. Antisera anti-HAP2 against the conserved extracellular region of the HAP2 amino acid sequence were obtained from rabbits. The expression of hap2 in the host and vector tissues was analyzed by using semi-quantitative RT-PCR, and the protein was examined by western blot and immunofluorescence. Based on the RT-PCR and WB results, HAP2 is expressed in both, sexual stages induced in vitro, and in infected ticks as well. We did not detect any expression in asexual erythrocytic stages of B. bigemina, relevantly anti-HAP2 specific antibodies were able to block zygotes formation in vitro.Conclusion Babesia bigemina HAP2 is expressed only in tick-infecting stages, and specific antibodies block zygote formation. Further studies regarding the function of HAP2 during tick infection may provide new insights into the molecular mechanisms of sexual reproduction of the parasite.Electronic supplementary materialThe online version of this article (10.1186/s13071-017-2510-0) contains supplementary material, which is available to authorized users.

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Section: Methodsmentioning

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Hap2, a novel gene in Babesia bigemina is expressed in tick stages, and specific antibodies block zygote formation

et al. 2017

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“…Existe un gran número de proteínas de garrapatas que han sido evaluadas como componentes para las vacunas, obteniendo diferentes porcentajes de protección, entre las que se encuentran BmVDAC y Subolesina (Taheri et al, 2014). La proteína BmVDAC está presente en las células del intestino de la garrapata, es una porina mitocondrial, interviene en regulación de la (Rodríguez-Hernández et al, 2015). La proteína Subolesina se localiza en diferentes órganos de la garrapata como los ovarios, las glándulas salivales y el intestino.…”

Section: Introductionunclassified

“…y Amblyomma cajennense con número de acceso AGI44599.1. Localización de las zonas geográficas de México de aislados de garrapatas R. microplus incluidas en el presente estudio.La secuencia utilizada como referencia para bmvdac corresponde a un fragmento de 819 pares de bases y va de los nucleótidos 1 al 819 de la cepa Media Joya de Tapalpa, Jalisco, reportada previamente(Rodríguez-Hernández et al, 2015), y de ese fragmento fueron amplificadas 750 pares de bases para el presente estudio. Este fragmento corresponde al 91.57% de la secuencia de referencia, y para subolesina la secuencia de referencia corresponde al fragmento de 442 pares de bases y va del nucleótido 1 al 442 de la cepa Munoz usada como referencia y publicada anteriormente…”

unclassified

Análisis de la variabilidad alélica de BmVDAC y Subolesina, dos candidatos vacunales contra Rhipicephalus microplus en aislados de México

Pérez-Soria

Hernández-Silva

Mosqueda

2019

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Introducción: Las garrapatas Rhipicephalus microplus son ectoparásitos hematófagos que impactan económicamente la ganadería a nivel mundial. Los acaricidas han sido una estrategia de control efectiva pero que generan la resistencia a estos químicos y la contaminación del medio ambiente. Una alternativa para contrarrestar los daños adversos de los químicos es la utilización de vacunas, las cuales presentan eficacia variable, debido posiblemente a la diferencia en la secuencia de aminoácidos entre los antígenos de las garrapatas de diferentes zonas geográficas. Por lo que el objetivo del presente trabajo fue analizar la variabilidad de dos antígenos vacunales: BmVDAC (Voltage Dependent Anion Channel) y Subolesina de R. microplus en aislados provenientes de diferentes estados de México.Método: Dos proteínas se seleccionaron con base a su eficacia como antígenos protectores: BmVDAC y Subolesina. Se colectaron garrapata R. microplus de distintos estados de México. Se realizaron extracciones ADN y ARN para la amplificación de bmvdac y subolesina respectivamente. Se obtuvieron las secuencias predichas de aminoácidos. Se hizo un análisis BLAST para confirmar la identidad entre las secuencias y alinearlas con el programa Clustal Omega para determinar el grado de similitud. Finalmente, se realizó un análisis con el programa MEGAX64 para determinar la relación filogenética de cada aislado.Resultados: Para BmVDAC, se observó un porcentaje promedio de identidad y similitud del 99.79% entre las diferentes secuencias de aminoácidos. En aislados de Chiapas, Nayarit, Media Joya, Querétaro, Tamaulipas y Guerrero se observó un porcentaje de identidad y similitud del 99.87%. Jalisco, Tabasco y Sinaloa presentaron el 99.56% en identidad y similitud. En promedio se observa un porcentaje de variabilidad de 0.21%. En el alineamiento de Subolesina con aislados de Yucatán, Nayarit, Querétaro, Chiapas, Sinaloa, Veracruz y Tamaulipas, y la cepa Munoz, se observó un porcentaje promedio de identidad del 99.87% y similitud del 100% entre las secuencias de aminoácidos. De las ocho secuencias, siete presentaron procentaje de identidad del 99.91%, mientras que para Nayarit el porcentaje fue de 99.39%. La variabilidad promedio fue del 0.13%. Los análisis filogenéticos no mostraron diferencias significativas entre las secuencias utilizando el método UPGMA. El porcentaje promedio obtenido del método Bootstrap de 10000 réplicas para los árboles filogenéticos de bmvdac y subolesina fue de más del 50%.Discusión o Conclusión: Este reporte representa la primera investigación respecto al grado de conservación entre aislados de R. microplus de diferentes estados en México para BmVDAC y Subolesina, dos candidatos vacunales contra esta garrapata. Considerando la variabilidad presentada entre las secuencias de los diferentes aislados de R. microplus, se puede concluir que BmVDAC y Subolesina son antígenos que se encuentran conservados, por lo que pueden considerarse como candidatos vacunales. Esta información es relevante para la selección de antígenos empleados en vacunas anti-garrapatas R. microplus en México.

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Vaccine efficacy of recombinant BmVDAC on Rhipicephalus microplus fed on Babesia bigemina-infected and uninfected cattle

Ortega-Sánchez

Camacho-Nuez

Castañeda-Ortiz

et al. 2020

Vaccine

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BmVDAC upregulation in the midgut of Rhipicephalus microplus, during infection with Babesia bigemina

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Hap2, a novel gene in Babesia bigemina is expressed in tick stages, and specific antibodies block zygote formation

Hap2, a novel gene in Babesia bigemina is expressed in tick stages, and specific antibodies block zygote formation

Análisis de la variabilidad alélica de BmVDAC y Subolesina, dos candidatos vacunales contra Rhipicephalus microplus en aislados de México

Vaccine efficacy of recombinant BmVDAC on Rhipicephalus microplus fed on Babesia bigemina-infected and uninfected cattle

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