Avrupa Deniz Levreği (Dicentrarchus labrax) Pilorik Sekasından Tripsin Enziminin Saflaştırılması ve Kısmi Karakterizasyonu

Abstract

Avrupa deniz levreği (Dicentrarchus labrax) pilorik sekasından tripsin enzimi, amonyum sülfat çöktürmesi (%30-%60) ve bir boyut dışlama kromotografisi olan Sephacryl S-200 kolonu kullanılarak saflaştırılmış; saflığı, sıcaklık ve pH'ya hassaslığı hesaplanarak karakterize edilmiştir. Avrupa deniz levreğinden tripsin enzimi 52,71 kat saflaştırılmış olup, %8,60 verimlilik oranına sahiptir. Enzimin molekül büyüklüğü SDS-PAGE elektroforez analizi sonucu 24 kDA molekül büyüklüğünde tek bant olarak tespit edilmiştir. Tripsin enzimi substrat olarak BAPNA (Nα-Benzoyl-L-arginine 4-nitroanilide hydrochloride) kullanılarak yapılan stabilite analizlerinde pH 8,0 ve 55 ºC'de optimal aktivite göstermiştir. Ancak, aktivitesinin 50 ºC'den sonra %30 ve fazlasını, 70 ºC'de ise tamamını kaybetmiştir. En iyi stabiliteyi pH 7,0-10,0 arasında göstermiştir. Böylece Avrupa deniz levreğinden geniş pH ve sıcaklık aralıklarında aktivite gösteren, farklı sanayi dallarında kullanılabilecek tripsin enzimi elde edilmiştir. Bulgular, sıcaklık ve pH faktörlerinin tripsin enzimi aktivitesini önemli düzeyde etkilediğini göstermiştir (P<0,05).