Avaliação da variabilidade do Grapevine leafroll-associated virus 1 e 3 por análise de seqüências de nucleotídeos e polimorfismo conformacional de fita simples

Abstract

Autor para correspondência: Thor V.M. Fajardo O enrolamento da folha, uma das principais doenças da videira (Vitis spp.), diminui a produção e a qualidade da uva (Fajardo et al., 2002) e pode ser causado por até nove espécies do Grapevine leafroll-associated virus (GLRaV), vírus associados ao floema. No Brasil, já foram relatados os vírus GLRaV-1, -2, -3 e -6, sendo as espécies GLRaV-1 e -3, família Closteroviridae, gênero Ampelovirus, as mais amplamente distribuídas e economicamente importantes. São vírus que possuem um único tipo de partícula, alongada e flexuosa, com cerca de 2000 x 12 nm. Apresentam o genoma composto por RNA fita simples, senso positivo, de cerca de 19 kb e massa molecular da proteína capsidial calculada em 35 a 37 kDa. Estas duas espécies são disseminadas de maneira semi-persistente por coccídeos e pseudococcídeos, transmitidas através da enxertia mas não são transmissíveis por inoculação mecânica (Fazeli & Rezaian, 2000;Martelli et al., 2002;Martelli, 2003;Gugerli, 2003).Os sintomas típicos de enrolamento dos bordos da folha para baixo são observados em cultivares européias de videira (Vitis vinifera L.), no final do ciclo vegetativo. Estes sintomas aparecem sempre nas folhas da base dos ramos, evoluindo para as demais folhas, podendo provocar o completo definhamento das plantas. Nas plantas muito afetadas, observa-se nos cachos maturação irregular eatrasada da uva. As videiras americanas (V. labrusca L.) e híbridas não mostram os sintomas característicos da virose e RESUMOAs principais espécies de vírus envolvidas na etiologia do enrolamento da folha da videira (Vitis spp.) são Grapevine leafroll-associated virus 1 e 3 (GLRaV-1 e -3). Neste estudo da variabilidade desses vírus, foram amplificados dois fragmentos de DNA (396 bp do GLRaV-1 e 602 bp do GLRaV-3) por RT-PCR, a partir de RNA total extraído de nervuras e pecíolos de videiras infetadas, utilizando-se dois pares de oligonucleotídeos. Os DNAs amplificados foram clonados e reamplificados, a partir dos clones recombinantes, e comparados quanto às diferenças conformacionais das fitas simples desnaturadas (SSCP). Foram observados dois padrões distintos de perfis eletroforéticos para cada vírus, tendo sido seqüenciado pelo menos um clone viral correspondente a cada padrão. As duas seqüências de nucleotídeos obtidas para o GLRaV-1 apresentaram maior homologia (79,8% e 87,4%) com um isolado australiano e as duas seqüências relativas ao GLRaV-3 exibiram maior homologia (75,1% e 81,8%) com um isolado norte-americano. Os resultados demonstraram a ocorrência de seqüências variantes destes vírus nas videiras analisadas.Palavras-chave adicionais: videira, Vitis, GLRaV-1, GLRaV-3, SSCP. ABSTRACT Evaluation of Grapevine leafroll-associated virus 1 and 3 variability by nucleotide sequence analysis and single-strand conformation polymorphismThe main viral species associated with grapevine (Vitis spp.) leafroll etiology are Grapevine leafroll-associated virus 1 and 3 (GLRaV-1 and -3). To partially evaluate the variability of these viruses, two DNA ...