Avaliação antitumoral da terapia fotodinâmica com azul de metileno em células neoplásicas mamárias

Abstract

A terapia fotodinâmica (TFD) é uma alternativa de tratamento para o câncer de mama, demonstrando seletividade e importante citotoxicidade aos tecidos malignos. Este tipo de terapia envolve o uso de dois componentes não tóxicos: uma substância fotossensibilizante e uma fonte de luz (como lasers de baixa potência). Em combinação, eles podem induzir efeitos celulares e teciduais por meio de processos dependentes de oxigênio, levando as células tumorais à morte por necrose, apoptose e autofagia. Assim, o objetivo foi avaliar a atividade antitumoral da terapia fotodinâmica utilizando células tumorais mamárias em modelos experimentais in vitro. A linhagem celular de tumor de mama 4T1 foi cultivada em meio RPMI suplementado com 10% de soro fetal bovino (SFB) e 1% de antibiótico a 37°C e 5% de CO2. O azul de metileno (AM) foi dissolvido em meio RPMI nas concentrações 5, 10, 15, 20, 25, 50, 100 e 150 µM, filtrado e as células foram incubadas durante 30 min a 37°C. Logo após esse período de incubação, a solução de AM foi removida, as placas lavadas eu um novo meio RPMI adicionado. A irradiação foi realizada com laser vermelho de baixa potência (660nm - AsGaAl), perpendicularmente e pontualmente, nos seguintes parâmetros: potência 100mW, densidade de energia 100 Jcm-2 , energia por ponto 2,8 J, modo de emissão de luz contínua e tempo de exposição 28s. Após a irradiação, viabilidade celular foi testada através de MTT, a migração celular foi realizada pelo método wound healing e níveis relativos de mRNA através de real time PCR. Os resultados de viabilidade celular indicam que as concentrações de AM de 5 a 50 µM não foram tóxicas para as células 4T1, enquanto as concentrações de 100 e 150 µM apresentaram citotoxicidade. Por outro lado, células 4T1 incubadas com AM e irradiadas com laser de baixa potência apresentaram redução da viabilidade e na migração celular na concentração de 50 µM. Níveis relativos de mRNA para caspase-6 não foram alterados nos tratamentos testados; já os níveis para Bcl-2 foram reduzidos após TFD 25 µM. Em conclusão, concentrações superiores a 100 µM de AM no tempo de incubação de 30 min geram efeitos citotóxicos nas células, reduzindo a viabilidade. Concentração de 50 µM demonstrou diminuição na viabilidade e migração celular após a TFD, indicando uma boa dose-resposta do tratamento para esse tipo de célula.