Analyte Comigrating with Trisialotransferrin during Capillary Zone Electrophoresis of Sera from Patients with Cancer

Abstract

Background: Serum concentrations of monoglycosylated isoforms of transferrin are increased by chronic ethanol intake. We investigated transferrin glycosylation in patients with cancer, in which aberrant glycosylation is also induced. Methods: We used a P/ACE 5000 series capillary zone electrophoresis (CZE) apparatus and a CZE carbohydrate-deficient transferrin reagent set to study 200 cancer patients who consumed alcohol moderately and 33 who were alcohol abusers; we then compared these patients with 56 healthy teetotalers, 89 moderate, and 112 excessive alcohol drinkers without known malignancies. Transferrin isoforms were identified by immunosubtraction with anti-human transferrin polyclonal antibody. Results: Seven peaks, P0 -P6, were visualized and completely or partly immunosubtracted when CZE separation was performed at pH 8.5. P0 was present in 95% of alcohol abusers with or without cancer. P3 was significantly higher in cancer patients and was only partly immunosubtracted as trisialotransferrin in all groups. The comigrating analyte was not altered by papain, precipitation by ethanol, or extraction by organic solvents, but was sensitive to acid hydrolysis, suggesting a polysaccharide structure. When isolated at pH 8.25, this analyte was higher in cancer patients. ROC curve analysis identified localized malignant neoplasia at P3 values above 5.8% of total transferrin (sensitivity, 0.78;

La transferrine hyposialylée et le % CDT. Mesure par électrophorèse capillaire avec le coffret CEofix CDT (ANALIS) chez des sujets consommateurs modérés

“…D'autres applications se mettent en place et l'on parle de profils car cette technique peut montrer des composés autres que la transferrine et apporter des informations sur une pathologie non suspectée (cancer ; [18]). L'interprétation du profil des isoformes de la transferrine doit être rigoureuse afin que l'électrophorèse capillaire devienne la technique de réfé-rence à la fois qualitative et quantitative.…”

“…Avec le % CDT, toutes techniques confondues, la spécificité est de 90 à 100 % [18]. En raison du consensus et des développements de méthodes, la sensibilité du % CDT est en cours de réévaluation.…”

“…Avec les recommandations de la société Analis au moment de notre étude, notre limite supérieure de référence est 1,2 % (définie par l'étendue supérieure de la boîte à moustache pour l'ensemble de notre population (figure non montrée) est voisine de celle de Lanz et al Notre % CDT en EC est semblable à celui d'autres auteurs (population de consommateurs modérés ou d' abstinents) (4,14-16) (Tableau 4). Fin 2003, La société Analis annonce les amélio-rations suivantes : temps d'analyse diminué (débit de 5 élec-trophorèses à l'heure), meilleure résolution entre la disialoet la trisialotransferrine, élimination des interférences avec la CRP ou avec des composés n'appartenant pas aux sialotransferrines [18]. Il reste le problème des cas rares d'immunoglobulines monoclonales migrant dans la zone des isotransferrines [13].…”

“…Chez les sujets consommateurs modérés (c'est-à-dire sans problème avec l'alcool), l'asialo-est détectée chez 5 % de cette population [18] et est présente à des concentrations < 0,5 % en conditions physiologiques [5] ; nous avons trouvé un sujet homme sur nos 68 sujets soit 1,5 % (si on considère uniquement les hommes : 3 %). La monosialo-quoique incluse dans la définition de la CDT, ne serait détectable que lorsque la trisialo-est anormalement élevée (soit > 6 % en HPLC) [12].…”

Monitoring of transferrin isoforms in biological samples by capillary electrophoresis

“…CZE-based assays rely on the unspecific measurement of absorbance at around 200 nm (peptide bond). This is a disadvantage as other biomolecules with comparable pI values, including C-reactive protein, immunoglobulins, light chains of immunoglobulins, and complement factors, could interfere with the detection of Tf isoforms when present at elevated concentrations [28][29][30]72,83,[88][89][90][91][92][93]. With the development of the second generation CEofix CDT-kit, the occurrence of interferences could be reduced but not abolished [30].…”