Análise proteômica do metabolismo de carboidratos de isolados de "Trypanosoma cruzi" de pacientes portadores de diferentes formas clínicas da doença de Chagas

Abstract

Chegar até aqui não foi um caminho fácil. Ninguém disse que seria, entretanto, nunca imaginei tantas curvas sinuosas. Mas, durante tal trajeto houve muito aprendizado, autoconhecimento, superação e companheiros que, já levava, levarei para toda vida.Sabe-se que toda criança por si é um cientista, afinal realiza todas as etapas do método científico para descobrir o mundo a sua volta. Observa algo novo, fica intrigado sobre o que pode ser, literalmente, experimenta seu questionamento e, rapidamente, tem uma resposta para aquilo. Os principais responsáveis por esse texto de dissertação são meu apoio e incentivo, aqueles que nunca deixaram a criança presente em mim morrer, meus pais.Já dizia o ditado que "se uma maritaca sozinha faz barulho, imagine um bando?" (sempre achei andorinhas supervalorizadas). Aqui não me caberão agradecimentos e gratidão pela presença, apoio e paciência. Vocês nem imaginam o que um simples "vai ficar tudo bem" impactou na minha caminhada. Aos amigos, que independente do tempo que os conheço, estão comigo por uma vida:

Análise proteômica de Trypanosoma cruzi epimastigotas derivados de tripomastigotas de portadores de diferentes formas clínicas da doença de Chagas

“…As amostras foram centrifugadas a 2500 g, por 10 minutos à temperatura ambiente. Os sobrenadantes, com os peptídeos diluídos, foram reservados e separados em três alíquotas por amostra (Figura 5) (VILLÉN;GYGI, 2008;BRUSCATO, 2018)…”

“…Por ultimo os peptídeos resultantes foram eluídos em 100 μL de solução de 80% acetonitrila e 0,1% ácido fórmico. As amostras foram secas em speedvac e congeladas a -80 °C até o momento de análise no espectrômetro de massas (Figura 5) ( RAPPSILBER;ISHIHAMA, 2007;BRUSCATO, 2018).…”

“…O máximo de 1% da taxa de descoberta falsa (FDR) foi definido para a identificação de proteínas e peptídeos. Uma quantificação foi realizada usando o algoritmo de quantificação livre de marcação (LFQ) implementado no ambiente MaxQuant, com 1 contagem de razão mínima e uma janela de 2 minutos para correspondência entre corridas (BRUSCATO, 2018).…”

“…Primeiro, as entradas reversas e "apenas identificadas pelo sitio" foram excluídas da análise posterior. A quantificação livre de rótulos foi realizada utilizando as intensidades de proteína espectral (LFQ) (BRUSCATO, 2018). Um teste t-Student p > 0,05 foi aplicado para considerar as proteínas diferentemente expressas entre os grupos.…”

“…O silenciamento de ATG24 praticamente dobrou o número de autofagossomos, sugerindo um papel na repressão da autofagia e na diferenciação fortemente acelerada(BRENNAND et al, 2015). ER que RHD3 pode não ser totalmente conservados entre as linhagens eucarióticas(CHEN et al, 2011).Tendo em vista que os isolados cardiodigestivos já haviam passado pelas fases cardíaca e digestiva e posteriormente evoluíram para a fase cardiodigestiva(BRUSCATO, 2018), acredita-se que ao longo do tempo as populações de T. cruzi se tornam cada vez mais…”